联合应用IGF-1与b FGF对大鼠坐骨神经再生的实验研究

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背景以及目的周围神经缺损的修复是医学上的难题之一。目前自体神经移植是治疗周围神经缺损的金标准,但仍存在供体缺乏、供体神经支配区功能障碍等缺陷。因此替代自体神经的载体成为现阶段研究的热点。甲壳素导管及其衍生物具有加速血管再生、促进内皮细胞生长、减少瘢痕形成等优点,现已成为替代自体神经可靠的载体。但单独应用甲壳素导管仍有局限性,它不能有效促进雪旺式细胞的分化及再生。胰岛素样生长因子(IGF-1)和碱性成纤维样生长因子(b FGF)不但能保护神经元并为神经系统发育提供营养,而且能促进雪旺细胞增殖,从而起到促进神经再生的作用。因此对周围神经损伤的修复有一定作用。但以甲壳素导管为载体,联合应用胰岛素样生长因子(IGF-1)和碱性成纤维样生长因子(bFGF)修复周围神经的研究尚未见报道。本实验探讨联合应用IGF-1与b FGF对大鼠坐骨神经再生功能的影响,从而为探索治疗周围神经损伤新方法提供依据。实验方法健康雄性SD大鼠80只,随机分为5组,每组16只,制备双侧大鼠坐骨神经缺损模型(神经缺损10mm),以可吸收甲壳素神经导管桥接神经两断端形成神经再生室。A组为空白对照组组:神经再生室内注入等渗生理盐水20μ L;B组为对照组:神经再生室内注入明胶溶液20u L;C组为实验组:神经再生室内注入IGF-1凝胶20μ L;D组为实验组:神经再生室内注入b FGF凝胶20μ L;E组为实验组(联合用药组):神经再生室内注入IGF-1+bFGF凝胶20μ L。术后4周、8周收集标本并观察再生神经的大体形态,检测神经传导速度,并进行特殊染色,S-100免疫组化检测,使用统计软件SPSS17.0进行统计学分析。实验结果1.4周后,肉眼可见各组神经缺损处已被新生组织填充,表面被大量的纤维组织包绕并有新生毛细血管,甲壳素导管内均有新生的组织,甲壳素导管未被完全吸收。8周后,肉眼观可见神经缺损处纤维组织明显减少,大量新生毛细血管,甲壳素导管基本被吸收并见其少量崩解碎片。2.神经电生理检测结果示:实验组E组再生神经的传导速度(4周:22.469±0.713,8周:28.095±1.163)优于对照组(4周:11.418±0.519;8周:12.130±0.494)、空白对照组(4周:11.455±0.530;8周:11.936±0.755)、实验组C组(4周:16.009±0.680,8周:22.097±0.673)、实验组D组(4周:16.083±1.019,8周:22.618±0.863)。实验组E组的再生神经传导速度明显优于其他各组,实验组C组和D组再生神经传导速度分别优于对照组A组和空白对照组B组,其差异有统计学意义(P<0.05),对照组A组与空白对照组B组的再生神经传导速度差别无统计学意义,实验组C组和D组的再生神经传导速度差别无统计学意义组间比较结果显示(P>0.0167)(组间多重比较行Bonferroni法检验,取校正=0.0167)。3. Loyez氏神经染色法(特殊染色)结果显示:实验组E组再生神经纤维数(4周:22.469±0.713,8周:28.095±1.163)优于对照组B组(4周:11.418±0.519;8周:12.130±0.494)、空白对照组A组(4周:11.455±0.530;8周:11.936±0.755)、实验组C组(4周:16.009±0.680,8周:22.097±0.673)、实验组D组(4周:16.083±1.019,8周:22.618±0.863)。实验组E组的再生神经纤维数的平均值明显高于其他各组,实验组C组与D组再生神经纤维数的平均值分别优于对照组A组和空白对照组B组,其差异有统计学意义(P<0.05),对照组A组与空白对照组B组的再生神经纤维数的平均值差别无统计学意义,实验组C组和D组的再生神经纤维阳性细胞数的平均值差别无统计学意义组间比较结果显示(P>0.0167)(组间多重比较行Bonferroni法检验,取校正=0.0167)。4.S-100免疫组化数据结果示:实验组E组再生神经纤维阳性细胞数(4周:22.469±0.713,8周:28.095±1.163)优于对照组B组(4周:11.418±0.519;8周:12.130±0.494)、空白对照组A组(4周:11.455±0.530;8周:11.936±0.755)、实验组C组(4周:16.009±0.680,8周:22.097±0.673)、实验组D组(4周:16.083±1.019,8周:22.618±0.863)。实验组E组的再生神经纤维阳性细胞数的平均值明显高于其他各组,实验组C组和D组再生神经纤维阳性细胞数的平均值分别优于对照组A组和空白对照组B组,其差异有统计学意义(P<0.05),对照组A组与空白对照组B组的再生神经纤维阳性细胞数的平均值差别无统计学意义,实验组C组和D组的再生神经纤维阳性细胞数的平均值差别无统计学意义组间比较结果显示(P>0.0167)(组间多重比较行Bonferroni法检验,取校正=0.0167)。结论1.甲壳素导管中注入IGF-1凝胶能促进实验性神经缺损后雪旺氏细胞的增殖。2.甲壳素导管中注入b FGF凝胶能够促进实验性坐骨神经缺损再生及功能的恢复。3.联合应用IGF-1与b FGF能协同提高再生神经的传导速度和促进雪旺氏细胞的增殖,因此联合应用IGF-1与b FGF对周围神经损伤后的神经细胞再生具有协同促进作用。
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