黄灯笼辣椒阳性筛选再生体系建立及pNOVcp表达载体的构建

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoxxjie
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黄灯笼辣椒(Capsicum chinense Jacq.,Yellow lantern)是海南省特有的辣椒品种,其营养价值高,口感风味独特,是海南黄灯笼辣椒酱的主要原料,也可用作医药工业原料,有较好的市场开发前景。但是该辣椒极易受到病虫害的侵袭,其中蚜虫和病毒病的危害较为严重。许多农户因此而失去了种植信心。因此,如何提高该辣椒的抗病性已成为当前重要的研究课题。植物基因工程技术为辣椒品种改良提供了一个新的途径。我们可以通过导入相关抗性基因对辣椒进行遗传改良。近年来,国内外在这方面研究成功的例子不多。植物基因工程研究不仅要有作物的高效遗传转化再生体系,而且也要有带有安全选择标记基因的遗传转化载体。当前研究的重点逐渐转向以带安全选择标记基因的阳性筛选遗传转化体系的研究。辣椒基因工程发展的最大障碍是辣椒离体再生困难,而且遗传转化效率太低。本研究以黄灯笼辣椒为研究对象,建立其高效的离体再生体系,并通过其对甘露糖的抗性试验,建立其甘露糖阳性筛选遗传转化体系。实验结果表明:不同苗龄的辣椒子叶再生能力存在差异,10~15d的子叶再生能力最强。不同激素组合及配比对辣椒外植体再生有不同影响,6-BA和2,4-D的使用有利于辣椒外植体愈伤的形成,而ZT、KT更为偏向不经过愈伤阶段而直接出芽。其中激素NAA和IAA在辣椒愈伤及芽诱导方面起着积极作用。NAA与IAA相比,前者诱导愈伤能力较强,后者诱导愈伤出芽能力较强。而且IAA更有利于不定芽的生根。AgNO3既可减轻外植体褐化,又可促进不定芽的分化。GA3在芽伸长阶段起着关键的作用。另外,低浓度的甘露糖对外植体分化有明显的促进作用,而较高浓度时却表现明显的抑制作用。经过抗甘露糖浓度试验,我们发现黄灯笼辣椒外植体在70g.L-1甘露糖浓度下逐渐黄化死亡,生长完全受到抑制。通过系统研究,我们认为黄灯笼辣椒较好的芽分化培养基为MS+6-BA(5)+IAA(1)+AgNO3(5)+mannose(5000);芽伸长培养基为MS+6-BA(3)+IAA(1)+AgNO3(5)+mannose(5000)+GA3(4);生根培养基为MS+IAA(0.5)。(mg.L-1)我们还利用pBI121和pNOV2819及CMVcp基因构建了以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因为选择标记的pNOVcp植物表达载体。
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