真核细胞的翻译后修饰对于细胞的重要性是众所周知的。其中丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸化修饰对细胞活动的调节是研究的热点。而且，近二十年的研究发现，在原核生物中，蛋白质的磷酸化修饰也是广泛存在的。不仅如此，由于许多细菌全基因组测序完成和细菌蛋白质组学，以及质谱技术的发展，发现丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸化修饰在多种细菌中存在。　　本研究目的是鉴定被巨噬细胞吞噬后在巨噬细胞内应激的铜绿假单胞菌的磷酸化蛋白质组，并与对照组铜绿假单胞菌磷酸化蛋白质组比较，找出差异磷酸化蛋白。试图找到在铜绿假单胞菌应激过程中起关键作用的磷酸化蛋白。　　实验将对数期铜绿假单胞菌加入小鼠巨噬细胞中处理，洗去胞外未被巨噬细胞吞噬的菌，裂解细胞得到胞内应激存活的铜绿假单胞菌。菌沉淀加入含8mol/L尿素的裂解液，置沸水浴中裂解，超声破碎，经过二硫苏糖醇还原和碘乙酰胺烷基化处理后胰酶酶切成多肽段。多肽段样品先经过高效液相色谱法反相C18柱除去杂质。再将样品通过强阳离子交换柱处理进一步除杂质，再通过反相C18柱除盐。脱盐后的样品再进行固定化金属亲和层析处理。实验用铁离子螯合柱对混合肽样品中的磷酸化多肽进行富集。磷酸化肽混合物的样品再经过高效液相色谱-质谱联用的技术处理，然后在数据库中搜索肽段所对应的蛋白质以及磷酸化位点，最后免疫印迹法验证磷酸化蛋白并分析。　　实验鉴定到对照组铜绿假单胞菌磷酸化蛋白24个，磷酸化位点57个;应激处理组磷酸化蛋白12个，磷酸化位点31个。对结果的磷酸化蛋白对比分析发现应激铜绿假单胞菌与对照组菌在毒力、铁代谢、细胞呼吸等方面的磷酸化蛋白存在差异。研究铜绿假单胞茵应激反应可以使我们更好的了解机体先天非特异性免疫铜绿假单胞菌入侵的机制，可以为一些疫苗的研制、一些阻断药物的研发提供理论上的基础