目的:筛选炎症介质对牛主动脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,e NOS）的表达及其磷酸化的影响并阐明其机制;在脓毒血症动物模型实验中进一步验证并研究其对小鼠动脉舒张功能的影响;筛选可能的治疗新靶点;方法:建立原代牛主动脉内皮细胞（bovine aortic endothelial cells,BAECs）;选取不同浓度的TNF-α和IL-1β、IL-6、PKC-α抑制剂（RO-32-0432）及PKC-α小干扰RNA（small interfering RNA,si RNA）处理BAECs;使用野生小鼠及i NOS基因敲除小鼠,用依那西普、RO-32-0432、D609预处理并腹腔注射LPS;采用Western Blot方法检测e NOS、PKC-α蛋白水平及各个磷酸化位点的变化;采用血管张力测试系统测试各组小鼠胸主动脉的舒张功能变化;结果:BAEC光镜下呈典型“鹅卵石”样生长,Ⅷ因子及CD31表达阳性;与对照组相比较,BAECs e NOS蛋白水平、e NOS Ser1179、e NOS Ser635均未发生明显变化（P<0.05）,IL-1、IL-6对e NOS蛋白水平及各磷酸化位点均无明显影响（P<0.05）;e NOS Thr497及p-PKC-α638随着TNF-α处理时间的增加而显著上调（P<0.05）;采用RO-32-0432及PKC-αsi RNA预处理,TNF-α处理BAEC后e NOS及e NOS Thr497位点均无明显变化（P<0.05）;与对照组相比,LPS组e NOS及PKC-α无明显变化（P<0.05）,e NOS Thr495及p-PKC-α638明显上调（P<0.05）,RO-32-0432及依那西普组e NOS Thr495位点及p-PKC-α638位点无明显变化（P<0.05）;胸主动脉与肠系膜动脉结果完全一致,野生型C57小鼠与i NOS基因敲除小鼠实验结果一致。与对照组相比,LPS注射后可明显引起小鼠胸主动脉舒张功能降低（P<0.05）,依那西普、RO-32-0432预处理可明显减缓LPS引起的小鼠胸主动脉舒张功能障碍（P<0.05）;D609预处理与LPS组相比无明显差异（P<0.05）;转基因小鼠与野生型小鼠之间结果一致;结论:实验结果表明TNF-α通过PKC-α途径引起eNOS Thr497位点上调,从而造成血管功能损害,提示炎症介质在脓毒血症血管损伤中起了非常重要的作用;动物实验中,PKC-α抑制剂可明显减缓血管舒张障碍,表明PKC-α抑制剂可能在治疗脓毒血症血管损伤中有一定作用。