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目的:探讨中药QHF复方对人肺腺癌细胞株A549细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮间质转化的影响,及抗肺癌裸鼠腋下移植瘤上皮间质转化、转移与TGF-β信号通路的关系。方法:1、体外实验:(1)选取人肺腺癌细胞株A549,以不同浓度的QHF复方干预,CCK8法检测QHF复方对人肺腺癌细胞株A549细胞增殖的影响;(2)采用显微镜观察法研究QHF复方对TGF-β1诱导的A549细胞形态学的影响;(3)细胞划痕实验检测QHF复方对TGF-β1诱导的人肺腺癌细胞株A549迁移能力的影响;(4)Transwell实验检测QHF复方对TGF-β1诱导的人肺腺癌细胞株A549迁移与侵袭能力的影响;(5)Western Blot检测TGF-β1诱导的人肺腺癌细胞株A549上皮间质转化标志物蛋白TGF-β信号通路蛋白表达水平的影响;(5)TGF-β1基因转染A549细胞建立TGF-β1高表达稳转细胞株A549/TGF-β1。2、体内试验:(1)分别选用人肺腺癌细胞株A549、转染对照细胞A549/GFP和稳转细胞株A549/TGF-β1,建立裸鼠腋下肺癌移植瘤模型,将60只荷瘤裸鼠按每组10只分为模型组、QHF组、A549/GFP组、A549/TGF-β1组、A549/TGF-β1+QHF组、A549/TGF-β1+抑制剂组;(2)以抑瘤率为指标,衡量QHF复方对腋下肺癌移植瘤模型小鼠肿瘤生长的抑制作用;(3)HE染色各组裸鼠肺组织,计数各组裸鼠肺转移灶数,统计肺转移率;(4)免疫组化法检测各组裸鼠肿瘤组织中E-cadherin和MMP-9的表达;(5)Western Blot检测各组裸鼠肿瘤组织中上皮间质转化标志物蛋白及TGF-β信号通路蛋白表达水平的影响。结果:1、(1)CCK8法实验结果显示,QHF复方在一定的浓度和时间范围内对人肺腺癌细胞A549细胞具有良好的增殖抑制作用,且呈现出一定的剂量和时间依赖性;(2)倒置显微镜下观察发现,经TGF-β1处理后的A549细胞变成细长梭型,而QHF复方与药物共处理组中细胞形态逆转为铺路石状;(3)细胞划痕实验结果显示,TGF-β1能诱导A549细胞迁移,而QHF复方能显著抑制TGF-β1诱导的A594细胞迁移,差异具有统计学意义(P<0.05);(4)Transwell实验结果显示,TGF-β1能诱导A549细胞侵袭,而QHF复方能显著抑制TGF-β1诱导的A594细胞侵袭,差异具有统计学意义(P<0.05);(5)Western Blot结果显示,QHF复方能够明显上调A549细胞中E-cadherin,下调Vimentin、Twist1/Snail及TGF-β信号通路相关蛋白(P<0.05);2、成功转染筛选得到TGF-β1高表达肺癌稳转细胞株A549/TGF-β1。3、(1)成功建立肺癌裸鼠腋下移植瘤模型,在非转染的A549细胞所造的裸鼠移植瘤模型中,QHF复方的抑瘤率为57.78%,在稳转细胞株A549/TGF-β1所造的裸鼠移植瘤模型中,QHF复方和抑制剂的抑瘤率分别为43.06%、49.31%;(2)HE染色结果显示,模型组裸鼠肿瘤肺转移灶数为13.3±4.16个,QHF组为1.7±0.57个,A549/GFP组为14.7±3.51个,A549/TGF-β1组为28.7±4.93个、A549/TGF-β1+QHF组为13.8±1.54个、A549/TGF-β1+抑制剂组为15.4±2.85个,与模型组比较,QHF组裸鼠肿瘤肺转移灶数减少,与A549/TGF-β1组比较,A549/TGF-β1+QHF组、A549/TGF-β1+抑制剂组裸鼠肿瘤肺转移灶数减少,差异具有统计学意义(P﹤0.01);(3)免疫组化结果显示,与模型组比较,QHF组裸鼠肿瘤组织中MMP-9表达降低,E-cadherin的表达升高,与A549/TGF-β1组比较,A549/TGF-β1+QHF组、A549/TGF-β1+抑制剂组的裸鼠肿瘤组织中MMP-9表达降低、E-cadherin的表达升高,差异具有统计学意义(P﹤0.01);(4)Western Blot结果显示,与模型组比较,QHF组裸鼠肿瘤组织中TGF-β1、TβRⅠ表达下降,与A549/TGF-β1组比较,A549/TGF-β1+QHF组、A549/TGF-β1+抑制剂组中裸鼠肿瘤组织中的TGF-β1、TβRⅠ表达下降。结论:1、中药QHF复方具有抑制人肺腺癌细胞株A549的细胞增殖、迁移与侵袭的能力,能上调与上皮表型相关标志物E-cadherin的表达,下调与间质表型相关标志物Vimentin、可负调控E-cadherin蛋白的转录因子snail、twist1以及TGF-β信号通路蛋白的表达,表明中药QHF复方在细胞水平可抑制上皮间质转化的发生,从而抑制人肺腺癌细胞A549发生侵袭转移;2、TGF-β1基因将促进肺癌裸鼠腋下移植瘤生长和发生肺转移,QHF复方干预后能够抑制移植瘤的生长和减少肿瘤肺转移,中药QHF复方抑制裸鼠肺癌腋下移植瘤肺转移可能是通过抑制TGF-β信号通路,进而抑制上皮间质转化而发挥其作用。