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脑水肿不仅是许多神经系统疾病共同的病理现象,还是导致这些疾病后来致命性神经损伤的关键因素,然而针对脑水肿的治疗,应用传统脱水药并不能明显改善预后和降低死亡率。因此深入研究脑水肿水平衡失调的分子机制,发现更为有效的干预药物及治疗靶点对于降低颅脑疾病的病死率,提高患者的生活质量具有十分重要的意义。大量的研究发现AQP4介导水的跨膜转运,与脑水肿的形成和吸取密切相关。炎性因子TNF介导脑损伤后的炎症反应,参与脑水肿的病理生理过程。近年来有研究表明炎性因子可通过调控AQPs表达参与组织水肿,我们前期的实验也证实TNF-α与脑水肿和AQP4表达呈正相关,这为治疗脑水肿提供了一条思路。我们前期研究发现活血方能够通过降低炎性反应程度减轻脑水肿,根据祖国医学“血水相关”理论,结合脑水肿的病机特点,我们此次重点研究活血化瘀中药对TNF-α诱导AQP4表达的影响及其机制。目的1、探讨TNF-α是否可诱导体外培养大鼠星形胶质细胞AQP4表达。2、探讨TNF-α诱导AQP4表达的信号通路。3、探讨活血化瘀中药对TNF-α诱导AQP4表达的影响及其机制,为临床上治疗脑水肿提供思路及实验依据。方法1、体外培养星形胶质细胞,筛选TNF-α浓度,分别用浓度为0,0.02,0.2,2,6,10ng/ml的TNF-α培养细胞6h后进行Real一time PCR检测,15h后进行Western blot检测;2、选择作用达到峰值的TNF-α浓度(2ng/ml)分别培养细胞0,3,6,15,24h进行Real-time PCR检测,分别培养0,6,15,24h后进行Western blot检测；3、用PDTC预处理30min后用浓度为2ng/ml的TNF-α培养细胞6h后进行Real-time PCR检测,15h后进行Western blot检测；4、分别设对照组,TNF-α组,丹参酮低浓度组(低浓度丹参酮+TNF-α),丹参酮高浓度组(高浓度丹参酮+TNF-α),血塞通低浓度组(低浓度血塞通+TNF-α),血塞通高浓度组(高浓度血塞通+TNF-α)培养细胞6h后进行Real-time PCR检测,15h后进行Western blot检测。结果：1.TNF-α诱导AQP4表达具有浓度依赖性。TNF-α诱导AQP4mRNA表达在2ng/ml和6ng/ml时最明显,10ng/ml TNF-α组AQP4mRNA表达有所回落；TNF-α诱导AQP4蛋白表达,在TNF-α浓度为0.02ng/ml即开始增加,2ng/ml时达到高峰,6ng/ml开始回落,10ng/ml时仍高于对于对照组。2. TNF-α诱导AQP4表达具有时间依赖性。TNF-α诱导AQP4mRNA表达3h时即开始,6h时达到高峰,15h时开始回落,24h时趋于正常；TNF-α诱导AQP4蛋白表达6h时即开始,15h时达到高峰,24h时有所加落,但仍高于正常水平。3. PDTC可阻断TNF-α对AQP4的诱导作用。与对照组相比,6h时tTNF-α组AQP4mRNA含量明显增加,而用PDTC预处理30min后再加入TNF-α培养6h,AQP4mRNA与对照组相比没有明显差异,比单用TNF-α明显减少；15h时TNF-α组与对照组相比,AQP4蛋白含量明显增加,而用PDTC预处理30min后再加入TNF-α培养15h,AQP4蛋白与对照组相比没有明显差异,比单用TNF-α明显减少。4、活血化瘀中药可抑制TNF-α对AQP4的诱导作用。与TNF-α组相比,丹参酮组AQP4mRNA及蛋白均明显减少,且丹参酮高浓度组AQP4表达与对照组无差异；与TNF-α组相比,血塞通组AQP4mRNA及蛋白均明显减少,血塞通低浓度组AQP4表达与对照组无差异。结论：1、TNF-α通过诱导AQP4表达导致脑水肿,且此过程具有浓度、时间依赖性。2.TNF-α诱导AQP4表达通过NF-κB途径。3、丹参酮、血塞通通过抑制炎性因子对AQP4的诱导从而减轻脑水肿。