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真菌病原中的蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)和微孢子虫(Nosema spp.)的影响最为严重,前者造成蜜蜂幼虫致死；而后者侵染成年蜂,严重影响重要腺体的发育,并明显的缩短了成年蜂的寿命,蜂群整体方面表现为群势衰弱,极易造成蜂群越冬失败。目前,对两种病的药物防治仍存在有效性和药物残留问题,另外也可通过选育具抗病性状的蜂王以降低病害的发生,但也未见理想的选育结果。同时在病原检测方面,检测技术有显微镜法、免疫学方法、分子生物学方法。前两种方法存在准确性不高,尤其是免疫学尚对相关蛋白的研究不深入,缺乏理论支持；分子生物学检测准确性很高,可以鉴别病原的种属。然而,这些方法均存在仪器、特异性、简便性等方面的问题,不能达到快速、准确、灵敏的诊断。因此建立一种准确、灵敏、快速、特异性强、无需专用设备实用的检测A. apis和Nosema spp的技术是必要的。环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术,作为一种分子检测方法,可在等温条件下,水浴约1h内完成反应,而且结果判断可通过观察离心反应中的产物和加入荧光染料后颜色变化,还可通过琼脂糖凝胶电泳判断,及实时浊度仪检测整个反应过程,从而达到对疾病快速、准确、灵敏的诊断。本研究建立并优化了A. apis和Nosema spp的LAMP检测体系,验证了其特异性并与普通PCR法进行灵敏度比对,最后用临床试验验证方法的可行性。主要研究结果：1)根据A. apis特异性序列ITS区的序列设计并筛选了4条特异性引物,建立了一种特异检测蜜蜂球囊菌的LAMP方法。反应条件优化后的检测体系为4 mmol·L-1Mg2+、 1.2mmol·L-1dNTPs、1.6 mmol·L-1FIP/BIP、0.4 mol·L-1甜菜碱。选用A. apis、东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、蜜蜂微孢子虫(Nosema apis)、蜜蜂残翅病毒(Deformed wing virus,DWV)、蜜蜂囊状幼虫病毒(Sacbrood virus, SBV)、黑蜂王台病毒(Black queen cell virus, BQCV)和以色列急性麻痹病毒(Israel acute paralysis virus, IAPV)的基因组作为LAMP反应模板进行特异性检测,结果显示仅有A. apis有扩增曲线和梯状电泳条带,建立的LAMP检测体系有很好的特异性。将抽提的A. apis基因组DNA按10倍梯度稀释作为模板进行PCR,可检测到浓度为0.2231×10-5μg·μL-1。对应的LAMP反应结果,浊度曲线和电泳条带显示可检测DNA浓度为0.2231×10-6μg·μL-1; LAMP反应检出灵敏度比PCR高10倍,临床检测验证方法可行。2)根据N. ceranae依赖DNA的RNA聚合酶Ⅱ大亚基(RPB1)序列设计并筛选了4条特异性引物,建立了一种特异检测N. ceranae的LAMP方法。反应条件优化后的检测体系为4 mmol·L-1 Mg2+、0 mol·L-1甜菜碱、1.0 mmol·L-1 dNTPs,1.4 mmol·L-1 FIP/BIP,反应温度为57℃,反应时间为70 min。选用N. ceranae、N. apis、A.apis、蜂房球菌(Melissococcus pluton)、DWV、SBV、BQCV和IAPV的基因组作为LAMP反应模板进行特异性检测,仅有N. ceranae有梯状电泳条带,表明建立的LAMP检测体系有很好的特异性。将抽提的N. ceranae基因组DNA液按10倍梯度稀释后作为模板进行PCR和LAMP反应,两种方法检测DNA最低浓度分别为0.136×10-5μg·μL-1 0.136×10-6μg·μL-1; LAMP反应检测灵敏度较PCR高10倍。PCR法和LAMP临床检测临床检测率一致,因此可以用于临床检测。