失眠是一种临床多见病和易发病,病程长,难治愈,严重者还可能诱发和加重心悸、胸痹、头晕、中风等疾病。西药如苯二氮卓类药物虽有催眠速度快的优势,但也具有耐受性及药物成瘾性等众多副作用。中国医学对抗失眠已有两千多年之久,很多治疗失眠的经典方剂被沿袭,其中双夏汤一直沿用至今。近年来该方剂在临床治疗方面报道很多,且显示了较好的治疗效果。但是,双夏汤镇静催眠的物质基础研究较少,活性组分尚不明确,严重阻止了该方的进一步开发利用。随着分子生物学在药理学方面的研究不断进步,用特定的受体对新化合物进行研究以其灵敏度高、特异性强、快速等优势愈来愈受到药物研究者的青睐。对于失眠药物研究方面,5-羟色胺1A(5-HT1A)受体已经被证实与睡眠有密切关系,激动5-HT1A受体可产生一定的镇静催眠效果。故本实验利用5-HT1A受体为靶标评价双夏汤分离所得到的组分(或馏分),并对双夏汤总黄酮进行了提取工艺的优化。主要内容包括：(1)根据各成分的化学性质(如酸碱性、极性等),对双夏汤进行化学成分组的分离,得到双夏汤总黄酮、总生物碱、总皂苷,参考文献,将这些提取物两两配伍,配伍得到的化学成分组群与单一化学成分组,共6个样品。样品刺激稳定转染5-HT1A受体的人胚肾细胞(HEK293/5-HTR1A),利用钙流检测装置(Flex Station II),通过检测细胞内钙离子与荧光剂结合产生的荧光信号值,对待检样品进行5-HT1A受体激动活性评价。结果：在所筛选组分中,双夏汤总黄酮为阳性结果,与阴性对照组相比,荧光信号明显增强,提示其对5-HT1A具有激动活性。部分样品虽荧光信号也有所增强,但在人胚肾细胞(HEK293)上也产生阳性结果,故不能确定是否激活5-HT1A受体。(2)按极性对双夏汤进行系统分离：半夏和夏枯草1：1经70%醇提浓缩后得到浸膏。利用硅胶柱层析法对浸膏进行分离。得到的馏分进行薄层鉴别,合并相同或相似馏分,挥干后得待测馏分。选择部分馏分刺激HEK293/5-HTRlA细胞,利用钙流检测装置(Flex Station II),通过检测细胞内钙离子与荧光剂结合产生的荧光信号值,对待检馏分进行5-HT1A激动活性评价。结果：与阴性对照组相比,极性较大的馏分荧光信号明显增强,可能是5-HT1A受体的激动剂。(3)对初筛产生阳性结果的双夏汤总黄酮采用响应面法进行提取方法的优化。最终确定的最佳提取工艺为液料比30：1,超声时间50min,超声功率120W。按照此工艺提取双夏汤总黄酮的提取率较高,实际提取率可达1.84mg/g。