核酸疫苗是90年代兴起的新型疫苗,已在多种疾病的防治中显示出巨大的潜能。然而核酸疫苗是一个新生事物,目前还存在许多尚未解决的问题,其中安全性的问题最为重要,直接关系到核酸疫苗的应用。全面评价乙肝DNA疫苗的安全性,我们进行了以下的毒理研究:1.急性毒性试验 本研究分别考察了乙肝DNA疫苗肌肉注射或皮下注射免疫小鼠或豚鼠的急性毒性,结果表明乙肝DNA疫苗在小鼠或豚鼠上未见任何明显急性毒性反应。半数致死量是推荐临床剂量的几百倍。 2.重复剂量的长期毒性试验 分别用三个剂量组的DNA疫苗(4.5m乙肝g/kg、1.5mg/kg、0.5mg/kg)肌注免疫小鼠56天(每1周给药2次,之后每周1次),从实验开始至停药后30天内进行毒性观察。结果表明小鼠体重、食量及粪便与对照组之间未见明显改变。血液学及临床生化指标均属正常范围内波动,未发现与受试药相关的毒性反应。尸检、器官重量检查未发现有与受试药物有关的毒性改变。观察了在上述给药条件下小鼠的多项疫苗免疫指标,发现乙肝DNA疫苗未发现有产生免疫耐受的迹象;不能导致自身免疫;不会诱导抗核抗体;不会引起慢性炎症及非特异性的免疫激活等免疫病理状况。 以PCR法检测质粒DNA的染色体整合情况,结果表明1μg基因组DNA中整合质粒低于10拷贝(即PCR的最大灵敏度);说明质粒DNA整合到宿主细胞基因组上并使细胞发生恶性转化的可能性微乎其微。 3.致突变及生殖毒性实验 致突变试验的结果表明乙肝DNA疫苗在-S9和+S9系统对CHL细胞染色体畸变均小于5%。乙肝DNA疫苗对染色体无畸变作用。乙肝DNA疫苗不引起母体毒性和胚胎毒性的无毒剂量(NOAEL)大于5.4 mg/kg。