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目的:本研究收集人正常及炎症牙髓组织,检测TOLL样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)在正常牙髓组织中的表达情况,比较正常与炎症牙髓组织的基本形态和TOLL样受体2(TLR2)的表达及分布。随后体外培养人牙髓细胞(Human dental pulp cells,h DPCs)和变形链球菌,用变形链球菌提取物刺激h DPCs,模拟炎症条件下的牙髓组织,检测变形链球菌提取物对h DPCs中TLR2表达的影响。探讨TLR2在牙髓组织中的定位与表达及与牙髓天然免疫的关系。方法:1.取临床拔除的牙体组织完整,无症状的第三磨牙获取牙髓组织,采用RT-PCR和Western-blot的方法检测TLR2基因及蛋白在正常人牙髓组织中的表达。2.分别收集正常和炎症人牙髓组织标本,通过HE染色法观察牙髓组织形态,免疫组织化学技术对组织中TLR2的表达进行定位。3.超声破碎法提取变形链球菌提取物,并作用于体外培养的h DPCs,免疫组化检测变形链球菌提取物作用于h DPCs后TLR2的表达和分布情况,荧光定量PCR(q PCR)检测TLR2 m RNA的表达水平。结果:1.正常牙髓组织表达TLR2。RT-PCR结果显示,琼脂糖凝胶电泳所有样本均显示条带,与预期扩增产物大小相一致,正常牙髓组织中均可表达TLR2 m RNA;Western blot结果显示,所有牙髓组织标本TLR2均表达阳性。2.HE染色结果显示,在炎症牙髓组织中,大量炎性细胞浸润及血管充血扩张,而正常健康的牙髓是疏松的结缔组织。免疫组化结果显示正常牙髓组织和炎症牙髓组织TLR2均表达阳性。TLR2表达于细胞质及血管周围组织,但炎症牙髓组织较正常牙髓组织阳明显增强。阴性对照组未见阳性表达。3.牙髓细胞传至第3代,形态均一,呈长梭形纤维细胞。免疫组化检测结果显示波形丝蛋白和DSPP呈染色阳性着色,角蛋白呈染色阴性着色,提示细胞来源于间充质,并且具有成牙本质细胞的特性。变形链球菌镜下观察成球状单体连成长链状。免疫组化结果显示,10 ug/m L和100ug/m L变形链球菌提取物10 ug/m L和100ug/m L作用牙髓细胞0 h、24h、48h后牙髓细胞均有TLR2表达,且h PDCs TLR2阳性细胞的表达率随着变形链球菌提取物刺激的时间增加而增大,均明显高于空白对照组(P<0.05)。PCR结果显示10 ug/m L和100ug/m L两种浓度变形链球菌提取物作用于h DPCs24 h、48h后,TLR2 m RNA的表达量明显增加,高于空白对照组(P<0.05),并且随刺激时间的延长表达量逐渐增加(P<0.05)。结论:牙髓组织中表达TLR2,且在炎症牙髓情况下,TLR2表达上调;并随着刺激时间的增加,TLR2表达增加。我们推测牙髓组织通过表达TLR2进行天然免疫防御并且TLR2参与牙髓损伤修复。