淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关基因克隆与初步鉴定

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在选育淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系的基础上,采用生理、生化方法研究其抗性机理 ,确定抗性的主要因子,依此克隆和鉴定抗性相关基因,以期从分子遗传学角度阐明抗性的本质.该文共分五部分:1.在实验室内用溴氰菊酯逐代汰选淡色库蚊并进行抗性稳定性观察.2.采用离体解淡色库蚊毒酶测定、活体增效试验和抗南倒频率测定等方法,探讨淡色库蚊对溴氰菊酯抗性的生理生化机制.3.采用反转录-PCR法从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感和抗性品系RNA扩增P540特异片段,采用T/A直接克隆法克隆并进行序列分析.4.为进一步探讨淡色库蚊CYP4基因与溴氰菊酯抗性的关系,对淡色库蚊24个CYP4新序列进行了cDNA芯片分析.采用高速机器人连续点样于固相尼龙膜表面,点膜按array排列.制备含α-<33>P-dATP的cDNA 探针与膜杂交.使用FLA-300共聚焦信号检测仪检测杂交信号.逆Nrothern再鉴定.5.探讨 了淡色库蚊CYP4基因与溴氰菊酯抗性的关系,初步鉴定的NYDR17等6个抗性相关基因尚未有 待进一步研究.
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