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为了探索更加有效的铁棍山药繁殖新途径,解决生产上由于长期营养繁殖造成的病毒感染严重、种质退化、产量下降等问题,本文以铁棍山药(Dioscorea opposita Thunb.cv. Tiegun)脱毒苗的带芽节段为试材,对其微型块茎的诱导形成进行了系统的研究,探讨了不同诱导方法(一步法,二步法,三步法)对微型块茎诱导形成的影响,同时对微型块茎的管内萌发也进行了初步的研究。研究结果如下:1.不同诱导方法对铁棍山药微型块茎的诱导效果不同,以一步振荡诱导法和三步循环诱导法相结合最为适宜。1)首次建立了铁棍山药微型块茎形成的一步振荡诱导法。该方法以MS+60g·L-1蔗糖的液体培养基为诱导培养基,进行快速振荡(120rpm)培养,35d左右可诱导形成微型块茎,诱导率可达100%。该方法可控性强、简易、高效,既可作为研究山药微型块茎诱导形成机理的一个理想模型,又可用于山药微型块茎的规模化生产。2)建立了铁棍山药微型块茎诱导的“改良两步法”,较前期本研究室建立的“普通两步法”诱导的单株微型块茎略有提高,但诱导时间并没有缩短。3)首次建立了铁棍山药微型块茎形成的三步循环诱导法。具体步骤为:(1)将铁棍山药节段在MS+0.005mg·L-1TDZ+30g·L-1蔗糖的培养基中静置培养30d;(2)将上述得到的植株接种于MS+30g·L-1蔗糖的培养基中振荡培养15d;(3)将第二步得到的植株接种于MS+60g·L-1蔗糖的培养基中先慢速振荡培养7d,再静置培养38d。当接种密度为3个/瓶时,90d后,单株微型块茎的数目为3.56;当接种密度大于12个/瓶时,90d后,每个培养容器均可获得大量的微型块茎和嫩枝,这些嫩枝切成的节段至少为刚接种时的2倍,可重新作为三步循环诱导法的起始材料。该方法与其它方法相比较具有诱导材料可循环利用、微型块茎形成周期短、数量多、品质好的显著优点。4)建立了三步循环诱导和一步振荡诱导相结合的微型块茎形成技术体系,该技术较两种方法单独使用微型块茎诱导效果更好、材料的利用率更高。具体方法为:将三步循环诱导法中第三步获得的大量带节茎段一部分进入三步法的第一步再次进行循环诱导微型块茎,另一部分则可通过一步振荡诱导法直接获得微型块茎。2研究了铁棍山药微型块茎管内萌发技术。刚收获的铁棍山药微型块茎接种于MS+30g·L-1蔗糖的培养基中进行振荡培养效果较好。培养7d后,Ⅰ级(直径>0.5cm)微型块茎萌发率为20.24%,Ⅱ级(直径0.1-0.5cm)微型块茎的萌发率为31.37%,Ⅲ级(直径0.05-0.1cm)微型块茎的萌发率为66.21%,萌发的微型块茎在移栽基质中均能成苗。以上研究所建立的微型块茎诱导和萌发技术体系对铁棍山药脱毒微型块茎的规模化生产及其应用具有重要的指导意义。