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目的:血管平滑肌细胞是一种位于血管中层的高度分化细胞,一旦血管收到病变损伤,平滑肌细胞就会大量增殖以修补血管的损伤。在动脉粥样斑块形成过程中,血管平滑肌细胞增殖并迁移到病变位置,导致内膜肥厚,血管腔狭窄,引起组织供血不足。通过抑制血管平滑肌细胞增殖成为了临床预防和治疗动脉粥样硬化的重要靶点。有研究发现,丝裂原活化蛋白激酶6(MAPK6)具有促进血管平滑肌细胞增殖的能力。因此是否能通过抑制MAPK6的表达抑制平滑肌的增殖值得探究。小RNA是一类长度小于200nt的RNA分子,其中miRNA是其中发挥较多生理作用的一类,越来越多的miRNA被发现可以作为动脉粥样硬化的标记物或重要调控因子。let-7家族是人类发现的第二种miRNA,其中let-7g可以在小鼠体内和体外减轻动脉粥样硬化。let-7g可以通过靶向结合低密度脂蛋白受体抑制血管平滑肌的增殖与迁移。青蒿素是中国学者屠呦呦在植物青蒿中提取的一种药物,本课题组前期提出了青蒿素能够缓解动脉粥样硬化的假说,发现青蒿素在体内可以减轻动脉粥样硬化的斑块大小。本研究主要目的是探究青蒿素是否能通过促进let-7g的表达,降低丝裂原活化蛋白激酶6的表达量从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,为青蒿素未来临床应用于心血管病奠定基础。研究方法:培养小鼠主动脉平滑肌细胞作为模型,分组进行不同的处理。使用EdU染色法在荧光显微镜下观察细胞增殖情况。使用Western Blot检测MAPK6蛋白质相对表达量的变化。使用PCR检测let-7g的表达量水平。使用荧光素酶报告基因检测let-7g与MAPK6的3‘UTR是否存在结合位点。使用流式细胞术检测细胞周期从而判断平滑肌细胞的增殖率。结果:(1)与对照组相比,PDGF组的细胞增殖率显著增高,ART组的细胞增殖率相对于PDGF组显著降低(两者p均小于0.001)。(2)PDGF组MAPK6的相对蛋白浓度水平比Control组显著增高(p<0.001),let-7g-5p相对RNA表达水平显著低于Control组(p<0.01)。与PDGF组相比,ART组的MAPK6蛋白相对浓度水平显著下降(p<0.05),let-7g-5p的相对表达量显著增加(p<0.05)。(3)let-7g-5p inhibitor 组的 S/G2 期比率显著高于 inhibitor 对照组(p<0.001),let-7g-5p mimics组的S/G2期比率显著低于mimics对照组(p<0.001)。MAPK6干扰组的S/G2 期的细胞比率显著低于 inhibitor 对照组(p<0.01)。(4)let-7g-5p inhibitor 组的MAPK6相对蛋白表达量相比于inhibitor对照组显著升高(p<0.0001)。let-7g-5p mimics组的MAPK6相对蛋白表达量显著低于mimics对照组(p<0.01)。荧光素酶实验显示野生型MAPK6(MAPK6 WT)与let-7g-5p共转染后荧光强度相比于显著下降,验证了 let-7g-5p与MAPK6的3’ UTR存在结合。(5)ART组的S/G2期细胞比率显著高于Control组。相比于ART组,ART+let-7g inhibitor组的S/G2期的细胞比率显著回升(p<0.001)。结论:青蒿素可以通过促进let-7g的过表达抑制MAPK6的表达量从而抑制小鼠血管平滑肌的增殖。