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目的:肺癌的死亡率位居恶性肿瘤的首位,且发病率呈逐年上升趋势。含铂类的化疗方案在肺癌治疗中占有重要地位,但不良反应限制其应用。临床实践中发现康莱特注射液(KLT)联合化疗可起到协同作用,且减轻不良反应,提高患者生活质量。本研究以近年的研究热点肿瘤微环境为出发点,从肿瘤免疫微环境的主要炎性细胞即肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophage,TAM)和缺氧微环境的关键因子缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)着手,利用Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,研究KLT联合顺铂对体内肿瘤生长、免疫状况的影响、对TAM、HIF-1α的影响及肿瘤组织中TAM与HIF-1α的关系,从肿瘤微环境的角度探讨KLT对化疗增效减毒、提高免疫的机制。方法:1体外培养Lewis肺癌细胞,取传至3-4代生长好的细胞接种于小鼠左腋皮下,建立Lewis肺癌移植瘤模型。观察记录小鼠的一般状况,如体重、进食、活动、毛发状况。待肿瘤最长径为0.8-1.0cm时,挑选肿瘤大小较均一的荷瘤小鼠24只,随机分为对照组(control)、康莱特组(KLT)、顺铂组(DDP)及DDP联合KLT组(DDP+KLT)4组,每组6只,腹腔注射相应药物,分别为:生理盐水(normal saline,NS)、NS;KLT、NS;NS、DDP;KLT、DDP,其中NS、KLT按12.5m L/kg,DDP按1mg/Kg(将10mg DDP溶于125ml氯化钠注射液中)每日腹腔注射,两次注射之间间隔12小时,连续给药14天。2给药第15天(最后一次给药后12小时),脱颈处死小鼠,称取小鼠体重,完整剥离肿瘤及脾脏,分别称重,计算各组肿瘤抑制率及脾脏指数。3采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测各组小鼠肿瘤组织中TAM比例。4采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测各组小鼠肿瘤组织中HIF-1αm RNA的表达。5采用SPSS 13.0统计软件建立数据库,将相关资料录入数据库,进行统计分析。瘤重、脾指数等计量资料用x__±s表示,经正态性检验和方差齐性检验后,各组指标均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD-t检验,相关性检验采用Pearson相关检验,各检验均以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1各组小鼠一般情况:小鼠皮下接种Lewis肺癌细胞后,接种6-8天小鼠进食、活动较前减少,毛发欠光泽,有脱落。6-7天建模成功,第10天绝大多数小鼠肿瘤最长径为0.8-1.0cm。荷瘤小鼠进食、活动、毛发等一般情况逐渐变差,对照组小鼠最明显。2各组干预对荷瘤小鼠的抑瘤效应:对照组、KLT组、DDP组、DDP+KLT组平均瘤重分别为(2.1517±0.29936)g、(1.1217±0.22798)g、(0.8867±0.18694)g、(0.7050±0.23227)g,三个治疗组的瘤重均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与DDP治疗组相比,KLT组、DDP+KLT组的瘤重与其无显著性差异(P分别为0.105,0.205)。3各组小鼠脾脏指数比较:对照组、KLT组、DDP组、DDP+KLT组脾脏指数分别为7.31±1.50、9.70±1.53、4.58±1.29、6.54±1.68,对照组、KLT组、DDP+KLT组的脾脏指数均高于DDP组,差异有统计学意义(P=0.005,0.000,0.036<0.05);对照组和DDP+KLT组的脾脏指数相比,差异无统计学意义(P=0.385),两组脾脏指数高于DDP组,而低于KLT组,差异有统计学意义(P<0.05)。4各组小鼠肿瘤组织中CD11b+F4/80+细胞比较:与对照组相比,KLT组、DDP+KLT组的肿瘤组织中CD11b+F4/80+细胞比例较低,差异均有统计学意义(P=0.020,0.013<0.05),DDP组TAM比例较对照组高,但无统计学意义(P=0.898);与DDP组相比,DDP+KLT组的肿瘤组织CD11b+F4/80+细胞比例显著降低(P=0.009<0.01)。 与对照组相比,KLT组、DDP组和DDP+KLT组3个治疗组肿瘤组织中HIF-1αm RNA表达量均较低,差异均有统计学意义(P=0.002,0.011,0.000<0.05);DDP+KLT组的肿瘤组织中HIF-1αm RNA表达量较KLT或DDP单独应用均降低,差异有统计学意义(P=0.039,0.009<0.05);DDP组及KLT组的表达差异无统计学意义(P=0.518)。6小鼠肿瘤组织中TAM和HIF-1αm RNA表达的相关性分析:四个组中TAM和HIF-1αm RNA的表达均无相关性(P=0.545,0.332,0.751,0.776>0.05)。5各组小鼠肿瘤组织中HIF-1αm RNA的表达:结论:1 KLT本身具有抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、增强小鼠免疫功能的作用,与DDP联合应用可增强其抗肿瘤作用,减轻化疗引起的免疫抑制。2 DDP可有效控制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长,但降低其免疫功能;KLT可改善化疗引起的免疫抑制,其机制可能与抑制TAM有关。3 KLT、DDP单独应用可改善Lewis肺癌小鼠肿瘤缺氧状态,联合应用优于任何一种药物单用。KLT对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤作用及对化疗的增效作用可能是通过下调HIF-1αm RNA水平、改善缺氧实现的。HIF-1α表达升高与肿瘤发展相关。