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目的：
本课题体外实验部分已经证实慢病毒载体介导的RNA干扰能高效、稳定的干扰HT-29细胞Livin基因的表达。HT-29细胞Livin基因抑制后，细胞增殖能力减弱，细胞凋亡增加，细胞周期重新分布，能增强5-Fu、奥沙利铂和伊立替康的抗肿瘤作用。现进一步通过体内实验探讨慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达，对大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长及对放化疗敏感性的影响，初步阐明Livin是否可成为大肠癌治疗的一个新靶点。
方法：
1.将正常培养的HT-29细胞(空白对照组)、转染携带Livin基因短发央RNA(short hairpin RNA，shRNA)慢病毒的HT-29细胞(实验组)，以及转染携带无关序列片段shRNA慢病毒的HT-29细胞(阴性对照组)分别接种于BALB/C(nu/nu)裸鼠，建立皮下移植瘤裸鼠模型，观察裸鼠体重及瘤体积的变化。第42天处死裸鼠后取下肿瘤组织，RT-PCR分析Livin mRNA表达的变化，免疫组化分析Livin蛋白表达的变化，TUNEL法检测细胞凋亡的变化。
2.将第一代大肠癌HT-29细胞皮下移植瘤瘤组织块接种至裸鼠，待长成一定体积后分别瘤内注射干扰慢病毒(实验组)、空载慢病毒(阴性对照组)和生理盐水(空白对照组)，同时腹腔内分别注入5-Fu、奥沙利铂和伊立替康。具体分为5-Fu、奥沙利铂和伊立替康实验组，5-Fu、奥沙利铂和伊立替康阴性对照组，以及5-Fu、奥沙利铂和伊立替康空白对照组共9组，挑选15个时间点共观察70天，每周2次，观察裸鼠的体重和肿瘤体积，绘制裸鼠体重和移植瘤生长曲线。
3.将第一代大肠癌HT-29细胞皮下移植瘤瘤组织块接种至裸鼠，待长成一定体积后分别瘤内注射干扰慢病毒(实验组)、空载慢病毒(阴性对照组)和生理盐水(空白对照组)，同时均给予6MV X线照射，2Gy/次，连续5天，总量为10Gy。共挑选24个时间点观察100天，观察裸鼠体重和肿瘤体积的变化，绘制体重和肿瘤生长曲线。
4.结果均采用SPSS17.0软件进行统计分析，计量资料组间比较采用单因素方差分析，计数资料之间比较采用x2检验，肿瘤体积生长采用重复测量方差分析，p<0.05有统计学意义，p<0.01有显著统计学差异。
结果：
1.Livin基因RNA干扰慢病毒载体系统的直接抑瘤作用：空白对照组、阴性对照组及实验组3组细胞均成瘤，成瘤率为100％。第42天处死裸鼠，3组裸鼠体重之间无统计学差异(F=0.352，p=0.709)。裸鼠移植瘤体积在各时期之间、分组之间存在总体差异(F=217.178，p<0.001；F=18.103，p<0.001)，各时期与分组之间存在交互作用(F=14.237，p<0.001)。体积抑瘤率为(50.04±0.07)％，瘤体重量明显减轻(F=4.847，p=0.024)，瘤重抑瘤率达(50.27±0.17)％。实验组Livin mRNA表达水平为(17.75±0.08)％，明显低于空白对照组(67.60±0.05)％和阴性对照组(68.54±0.03)％，差异有统计学意义(F=89.971，p<0.001)。实验组Livin蛋白表达水平为(36.00±3.40)％，明显低于空白对照组(85.00±3.15)％和阴性对照组(80.33±3.08)％，差异有统计学意义(F=107.321，p<0.001)。实验组沉默Livin基因后组织中细胞凋亡数增多，凋亡率为(23.67±2.25)％，明显高于空白对照组(5±1.50)％和阴性对照组(8.33±1.82)％，差异有统计学意义(F=56.936，p<0.001)。
2.Livin基因RNA干扰慢病毒载体系统联合化疗药物的抑瘤作用：裸鼠体重在观察时间、分组总体之间都存在差异(F=3.086，p=0.002；F=11.739。p<0.001)。肿瘤体积在各时间点之间总体存在显著差异(F=64.993，p<0.001)，在分组之间总体也存在显著差异(F=8.610，p<0.001)。5-Fu、奥沙利铂、伊立替康实验组肿瘤体积均显著小于它们的阴性对照组(p=0.001，p=0.049，P=0.001)。
3.Livin基因RNA干扰慢病毒载体系统联合放射线的抑瘤作用：裸鼠体重在各观察时间点、分组之间总体无统计学差异(F=1.1015，p=0.330：F=1.022。p=0.383)。肿瘤体积在各时间点、分组之间总体存在显著差异(F=71.250，p<0.001；F=10.702，P=0.001)，实验组肿瘤体积显著小于阴性对照组和空白对照组(p均=0.001)。
结论：
慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达后，能抑制大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长，增加移植瘤对放化疗治疗的敏感性。Livin基因有望成为大肠癌治疗的新靶点，慢病毒载体介导的RNA干扰技术有望成为有效的基因治疗工具。