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目的:九味通窍汤在临床上对中风、偏头痛、脑外伤性耳鸣耳聋及眩晕等疾病的防治及症状的改善有较好的效果,疗效确切。多项实验研究表明全方中的多味药材及单体成分具有抗脑胶质瘤的作用,因此全方可能通过多效应、多靶点、多环节的抗肿瘤作用,作用于肿瘤发生发展的多个环节,同时有毒副作用低、提高机体免疫力、不易产生耐药性的特点。九味通窍汤全方没有明确可靠的质量控制指标,因此本文对九味通窍汤及其单味药材指纹图谱中的化学成分进行了定性分析,同时定量分析了九味通窍汤中代表性单体活性成分的含量,并对九味通窍汤及单体成分槲皮素抗脑胶质瘤的药理作用及作用机理进行初步探索。方法:(1)采用HPLC-MS法对九味通窍汤及其君药黄芪和白花蛇舌草中的代表性单体成分进行了定性分析。(2)采用HPLC法测定了九味通窍汤及其君药白花蛇舌草中槲皮素的含量。(3)采用HPLC法测定了九味通窍汤全方、全方各有机溶剂萃取部位及其单味药材黄芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷4种成分的含量。(4)采用MTT法检测药物对U251细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测U251细胞的凋亡率,研究九味通窍汤全方醇提取物及所含单体活性成分槲皮素对体外培养的U251神经胶质瘤细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用。结果:(1)九味通窍汤全方醇提取物的指纹图谱共有28个色谱峰,其中15号峰为槲皮素,tR为31.55min,紫外最大吸收波长为203、255、369nm,分子离子峰[M+H]+303,[M-H]-301,[2M-H]-603,可确定来自白花蛇舌草的醇提取物;14号峰为毛蕊异黄酮,tR为31.33min,紫外最大吸收波长为219、249、290nm,分子离子峰[M+H]+285,[2M+H]+569,[M-H]-283,[2M-H]-567;5 号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷,tR为20.50min,紫外最大吸收波长为220、258nm,分子离子峰[M+H]+447;18号峰为芒柄花素,tR为40.90min,紫外最大吸收波长为249nm,分子离子峰[M+H]+269;12号峰为芒柄花苷,tR为28.02min,紫外最大吸收波长为250nm,分子离子峰[M+H]+431,可确定来自黄芪的醇提取物。(2)3批次九味通窍汤全方醇提取物中槲皮素含量测定结果为:20131202批次为 33.1 1μg/g;20131203 批次为 38.29μg/g;20131204 批次为 24.25μg/g,其中槲皮素含量最高的九味通窍汤方剂中君药黄芪的产地为内蒙,白花蛇舌草的产地为江苏,单味药材白花蛇舌草中槲皮素的含量为115.96μg/g。(3)乙酸乙酯萃取部位中代表性成分的含量比例最接近黄芪醇提取液,但缺失成分芒柄花素,氯仿萃取部位中代表性成分的含量比例最接近九味通窍汤全方醇提取液,并只有氯仿萃取部位包含所测定的所有代表性成分。(4)结果表明九味通窍汤全方醇提取物及槲皮素对U251细胞的增殖有抑制作用,呈时间和浓度依赖性,槲皮素对U251细胞有诱导凋亡的作用。结论:本文定性和定量分析了临床应用方剂九味通窍汤的化学成分及其活性成分的含量,初步揭示了其抗脑胶质瘤的药理作用及作用机制,九味通窍汤全方及其单体成分槲皮素具有抗脑胶质瘤作用,具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,其作用机制有待进一步研究。