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嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,AH)已成为人-畜-鱼共患病的一类重要病原菌。研究表明,该菌的耐药性已呈现快速增长趋势,而在细菌耐药性的散播中,整合子起着重要作用,这就给嗜水气单胞菌病的防治造成了很大困难。近年来,中草药和天然植物因能恢复细菌对抗生素的敏感性而逐渐成为研究的焦点。基于以上几点,本试验将针对嗜水气单胞菌的快速检测和耐药性方面进行相关研究,具体如下:1、嗜水气单胞菌气溶素和I类整合子多重PCR检测方法的建立及应用针对嗜水气单胞菌的16SrRNA、气溶素毒力因子和I类整合酶基因,本试验建立了一个三重PCR快速检测方法。通过对中华鳖、黄鳝、大鲵、鲫鱼和棘胸蛙五种来源的疑似病原菌进行检测,共分离出27株嗜水气单胞菌,其中气溶素阳性菌占70.37%(19/27),I类整合子阳性菌占44.44%(12/27)。药敏试验结果表明各分离菌均呈现出严重的多重耐药性,除8种药物的耐药率均为100%外,其余12种药物的耐药率情况相同,均为I类整合子阳性菌株的耐药率高于阴性菌株,说明整合子的存在可能导致了细菌耐药性的增加。2、I类整合子的定位本试验采用PCR扩增法和斑点杂交法,同时对12株阳性菌株进行I类整合子的定位。通过对比,发现两种检测方法的结果完全相同,即其中10株菌在染色体和质粒上均含有I类整合子,而剩余的2株菌仅在染色体上含有I类整合子。3、耐药基因的定位本试验采用大蒜芦荟汁对AH1菌株(含有大、中、小三种质粒)进行质粒消除,消除率达到90%。综合质粒转化和消除实验,发现AH1耐头孢曲松、阿米卡星、头孢哌酮、呋喃唑酮、链霉素、诺氟沙星、恩诺沙星、利福平的基因位于小质粒上,耐庆大霉素、复方新诺明、强力霉素、妥布霉素、氨苄西林、阿莫西林、磺胺甲噁唑、四环素的基因位于大质粒上,耐头孢唑林、青霉素G、红霉素的基因位于染色体上。