β-肾上腺素能受体激动剂介导星形胶质细胞膜钠/钾-ATP酶α亚型的信号传导机制

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目的:⑴异丙肾上腺素是否影响星形胶质细胞钠/钾—ATP酶α2的表达。⑵异丙肾上腺素是否通过EGFR间接激活来影响星形胶质细胞膜钠/钾—ATP酶α2的表达。⑶Src是否参与了异丙肾上腺素对钠/钾—ATP酶α2表达的影响。 方法:原代培养的星形胶质细胞取材于新生的CD—1小鼠大脑半球,无菌分离大脑半球皮质,切割,震荡,先后通过100μM和70μM的滤网,放入Falcon Primaria培养皿中,将制备好的细胞放于5% CO2,37℃细胞培养箱中。培养液为含有20%马血清的DMEM,每隔3天更换一次培养液,第三次细胞换液,培养液中马血清的浓度改为10%。培养2周后,再加入0.25 mM dBcAMP促进细胞分化成熟,一周后用于实验。运用酶活性测定法通过紫外分光光度仪来分析钠/钾—ATP酶α2的酶活性。应用多组资料使用单向方差分析方法进行比较,P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果:①通过研究表明,异丙肾上腺素能够引起星形胶质细胞钠/钾—ATP酶α2亚型表达上调,并且具有浓度依赖性,浓度为1nM、10 nM的异丙肾上腺素未对钠/钾—ATP酶α2亚型产生影响,而浓度为100 nM、1μM和10μM均引起其表达增高,并且随着异丙肾上腺素浓度的增大,钠/钾—ATP酶α2亚型的表达效果也随之增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。②浓度为1μM的上皮生长因子受体特异性拮抗剂AG1478能够完全抑制由浓度为100 nM的异丙肾上腺素引起的钠/钾—ATP酶α2亚型酶活性的增强,10μM Src酪氨酸激酶抑制剂PP1能够抑制此上调过程,差异具有统计学意义(P<0.05)。③浓度为10μM的Zn2+依赖性金属蛋白酶抑制剂GM6001与PP1的作用一样,也能抑制由浓度为100 nM异丙肾上腺素引起的钠/钾—ATP酶α2亚型酶活性增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。④浓度为10μM的MEK特异性拮抗剂U0126能够抑制由浓度为100 nM的异丙肾上腺素引起的钠/钾—ATP酶α2亚型酶活性增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论:β—肾上腺素受体激动剂异丙肾上腺素能够使星形胶质细胞的钠/钾—ATP酶α2亚型的表达上调。在此上调的过程中,通过EGFR及其间接激活途径使钠/钾—ATP酶α2亚型mRNA表达上调及其酶活性增强。同时,此途径还有Src和MEK的参与。
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