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脂肪酶是一类重要的生物催化剂,可以催化解脂、酯交换、酯合成等反应,广泛应用于食品加工、医药和精细化工等行业。南极假丝酵母脂肪酶A（Candida antarctica lipase A,CALA）,是现有研究中唯一一种对甘油三酯sn-2位显示出偏好的脂肪酶,它对位阻醇（包括二级和三级醇）,表现出较高的活性,同时亦具有良好的温度稳定性和底物特异性,具有很高的工业应用价值。本文对CALA脂肪酶在毕赤酵母中表达、纯化、酶学性质及发酵条件进行了研究,研究内容如下:应用DNA重组技术将CALA脂肪酶基因克隆到毕赤酵母组成型表达载体pGAPZαA中,利用电击转化的方法将重组载体整合到毕赤酵母基因组上,通过酵母菌落PCR及三丁酸甘油酯培养板的筛选,获得阳性重组毕赤酵母。SDS-PAGE分析重组酵母培养上清,显示一条大小为45 kDa的目的蛋白带。采用响应面法对重组毕赤酵母的发酵条件优化,经优化后确定其最佳表达条件为:初始pH值为7.2、酵母粉10 g/L、葡萄糖27 g/L、温度31°C。此时CALA酶活从20.40U/ml提高到了25.62 U/ml,提高了25.59%。将重组酵母接种至YPD,30°C,250 r/min培养72 h后,离心收集发酵液上清,所获得的发酵液首先使用Vivaflow 200（10kDa）膜包进行浓缩,浓缩液用50%饱和度的硫酸铵进行盐析处理后,经过Sephadex G25换盐及阴离子交换层析等分离纯化步骤,获得纯度大于90%的目的蛋白。目的蛋白回收率为35.21%,纯化倍数为153.26倍,比酶活达到384.90 U/mg。对重组CALA进行酶学性质研究发现:该酶的最适温度为70°C,最适pH值为8.0。经50°C保温2 h,仍含有60%水解酶活力;在pH 7.0和pH 8.0溶液中比较稳定。经DMSO处理1 h,仍保持90%的活性;Ca2+处理酶液1 h之后,CALA的酶活基本没有变化;重金属离子对CALA的酶活的抑制作用较其他的强;非离子型表面活性剂浓度越高能提高CALA的酶活,且浓度越高,活化作用越强; PMSF抑制CALA的活性,且浓度升高抑制作用增强。脂肪酶催化大豆油水解制备甘二酯能力分析结果表明CALA具有水解Sn-2位脂肪酸酰基的偏向性,但专一性不明显。