【摘 要】
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着丝点在有丝分裂染色体忠实地传递给子代细胞的过程中起重要作用，对于遗传物质的稳定性及生物的正常发育有重要影响。Mitosin为一分子量350kDa的着丝点蛋白，它在有丝分裂期短暂定位于着丝点动粒的外层和纺缍体极。本研究利用已经鉴定的mitosin两个动粒定位功能域ATK（mitosin氨基酸序列2094～2487+2792～2887）和TG（mitosin氨基酸序列2488～3113）作为诱饵，通
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着丝点在有丝分裂染色体忠实地传递给子代细胞的过程中起重要作用，对于遗传物质的稳定性及生物的正常发育有重要影响。Mitosin为一分子量350kDa的着丝点蛋白，它在有丝分裂期短暂定位于着丝点动粒的外层和纺缍体极。本研究利用已经鉴定的mitosin两个动粒定位功能域ATK（mitosin氨基酸序列2094～2487+2792～2887）和TG（mitosin氨基酸序列2488～3113）作为诱饵，通过酵母双杂交系统从胎盘库中筛选出mitosin结合蛋白ATF4/CREB2 N端缺失的两个部分编码区，分别位于ATF4氨基酸序列56～351和185～351。缺失实验表明，ATF4/CREB2的bZip功能域和mitosin的中心区（mitosin氨基酸序列2792～2887位置）以及2864位置的半胱氨酸是二者相互作用所必需的。利用GST融合蛋白的体外结合实验同样证实了二者的相互作用。从而表明mitosin和ATF4的结合与mitosin和动粒的相互作用存在类似的机制。凝胶延迟实验证实，体外表达的ATF4能特异结合于通用CRE位点（TGACGTCA），而mitosin氨基酸序列2488～2644功能区干扰ATF4与CRE形成复合物；相反，mitosin 2645～3113功能区则能够与ATF4以及CRE形成一个稳定的三元复合物，提示两个蛋白可能存在二聚化。与ATF4抑制内啡肽启动子下的报告基因类似的是，本研究通过CHO细胞中的短暂转染实验发现，ATF4和mitosin协同抑制E-selectin启动子下游的荧光素酶报告基因，而ATF4虽然同样能抑制Ⅰ型T细胞的白血病病毒末端重复序列下的报告基因，但mitosin 2488～3113功能域却具有激活病毒LTR下游报告基因的功能，这表明mitosin通过与ATF4的相互作用，可能调节细胞基因的表达并可能在部分病毒感染所引起的细胞转化过程中起一定作用。
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