背景:卵巢恶性肿瘤病死率高、预后差,严重威胁了女性的生命和健康。其中上皮性恶性肿瘤占85%~90%,卵巢浆液性癌是卵巢上皮性恶性肿瘤中最常见的一种,其预后与临床期别、病理类型、细胞分化程度、术后残存癌灶的大小及肿瘤细胞对化疗的敏感性有关。卵巢上皮性癌的发病学说——二元论,已被广泛接受及认可,根据卵巢癌二元论学说,将浆液性卵巢癌分为I型和II型。I型卵巢癌分化程度高,恶性程度低,主要是来自卵巢交界性肿瘤和子宫内膜异位,镜下常见良性-交界性-癌的过渡,主要包括:低级别浆液性癌、低级别子宫内膜癌、透明细胞癌及黏液性癌等。II型卵巢癌,分化程度低,恶性程度高,多来源于输卵管上皮,易于早期转移,主要包括:高级别浆液性癌、低分化子宫内膜样癌、未分化癌及癌肉瘤等。因为卵巢癌的早期诊断对其预后很关键,所以目前找到特异的诊断指标或有效的治疗方案是治疗卵巢癌的首要任务。转录因子是一种具有特殊结构的蛋白质分子,能够行使调控基因表达的功能。SPl/Krüppel样转录因子(Spl-like and Krüppel-like transcription factors,SP1/KLFs)参与了细胞的增殖与分化。SP1是第一个被克隆的Sp/KLF家族中的转录因子,在哺乳动物细胞中广泛表达,目前关于SP1的研究已经有很多,SP1已作为促癌蛋白被大家所熟知,但其在肿瘤发生、发展过程中的作用还未完全清楚,它在浆液性卵巢癌中的表达情况还有待进一步研究。Krüppex样锌指转录因子(Krüppel-like transcription factors,KLFs)是SPl/Kruppel样转录因子家族中的一个亚家族,KLFs对不同基因启动子的GT盒具有不同的亲和力,因此KLFs因子在不同组织中既可作为转录激活因子,也可作为转录抑制子。KLFs在细胞增殖、分化、调亡中起重要作用。KLF4在人类组织中广泛表达,其与SP1在锌指的C-端具有高度同源性,已有研究证实SP1与KLF4在胰腺癌、胃癌中的表达呈负相关,在多数肿瘤细胞中KLF4为抑癌基因,例如宫颈癌,肝癌,皮肤癌等,而在乳腺癌,口腔癌中是癌基因,但其在卵巢癌中的作用还不清楚。P21是P53基因下游靶基因的转录产物,是CDKIs(细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白)家庭中第一个被发现的,P21的低表达与许多肿瘤的发生密切相关。SP1为P21转录所必需,SP1对P21的调控很可能与c-Myc有关,从而促进细胞增殖。目前关于P21在卵巢癌中的作用还不十分清楚,有研究表明其作为抑癌基因发挥作用。本文主要通过研究三者在卵巢不同级别浆液性腺癌中的表达情况,进一步研究卵巢浆液性癌二元论学说,寻找卵巢癌诊断及预后评估指标,为卵巢癌的早期诊断和治疗提供更好的理论依据,以提高不同级别卵巢癌患者的生存率。目的:研究SP1、KLF4和P21在卵巢高级别浆液性腺癌、低级别浆液性腺癌、正常输卵管及正常卵巢组织中的表达情况,分析SP1、KLF4和P21的表达与卵巢癌的病理分级、手术病理分期及预后的关系。分析SP1与KLF4、P21蛋白表达的相关性,进一步探讨SP1、KLF4和P21在卵巢浆液性腺癌的发生、发展中所发挥的作用。研究方法:收集2006年1月至2011年1月河北医科大学第二医院妇产科进行手术治疗的临床资料完整的、病理证实的卵巢浆液性腺癌标本65例,其中高级别42例,低级别23例,另取正常输卵管组织15例、正常卵巢组织11例作为对照,根据二元论,低级别腺癌选择正常卵巢作对照,高级别腺癌起源于输卵管,选择输卵管上皮做对照。采用免疫组织化学(S-P法)检测卵巢浆液性腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白的表达情况。实验过程严格按照免疫组化(S-P法)检测试剂盒操作步骤进行,阳性对照选择已知的阳性病理切片,阴性对照选择磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗。对44例具有完整随访记录的卵巢浆液性腺癌患者进行随访,其中低级别浆液性腺癌患者13例,高级别浆液性腺癌患者31例。运用统计分析计算3年及5年生存率,分析SP1、KLF4和P21蛋白的表达以及手术病理分期、病理分级、术后化疗方式、术后残余癌灶大小与患者预后的关系。统计学处理采用SPSS13.0统计软件,计数数据采用X2检验或Fisher确切概率法,SP1、KLF4和P21三个指标之间的相关性分析采用Spearman等级相关。结果以P<0.05为有显著性差异。结果:1卵巢低级别腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表达情况1.1 SP1蛋白表达结果在正常卵巢组织、低级别腺癌中,SP1蛋白表达的强阳性率分别为9.1%和65.2%,统计结果显示:低级别腺癌组SP1蛋白表达的强阳性率明显高于正常卵巢组,两者比较有显著差异(P<0.05)。1.2 KLF4蛋白表达的结果在正常卵巢组织、低级别腺癌中,KLF4蛋白表达的强阳性率分别为72.7%和34.8%,统计结果显示:低级别腺癌组KLF4蛋白表达的强阳性率明显低于正常卵巢组,两者比较有显著差异(P<0.05)。1.3 P21蛋白表达的结果在正常卵巢组织、低级别腺癌中,P21蛋白表达的强阳性率分别为72.7%和26.1%,统计结果显示:低级别腺癌组P21蛋白表达的强阳性率明显低于正常卵巢组,两者比较有显著差异(P<0.05)。2卵巢高级别腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表达情况2.1 SP1蛋白表达结果在正常输卵管组织、卵巢高级别浆液性腺癌中,SP1表达的强阳性率分别为6.7%和73.8%,统计结果显示:高级别腺癌组SP1蛋白表达的强阳性率明显高于正常输卵管组,两者比较有显著差异(P<0.05)。2.2 KLF4蛋白表达结果在正常输卵管组织、卵巢高级别浆液性腺癌中,KLF4表达的强阳性率分别为86.7%和16.7%,统计结果显示:高级别腺癌组KLF4蛋白表达的强阳性率明显低于正常输卵管组,两者比较有显著差异(P<0.05)。2.3 P21蛋白表达结果在正常输卵管组织、卵巢高级别浆液性腺癌中,P21蛋白表达的强阳性率分别为66.7%和11.9%,统计结果显示:高级别腺癌组P21蛋白表达的强阳性率明显低于正常输卵管组,两者比较有显著差异(P<0.05)。3卵巢不同级别浆液性腺癌中SP1、KLF4和P21蛋白表达的比较3.1卵巢不同级别浆液性腺癌中SP1蛋白表达情况卵巢低级别腺癌组和高级别腺癌组,SP1蛋白的强阳性表达率分别为65.2%和73.8%,统计分析表明,低级别组和高级别组中SP1蛋白的强阳性表达率无显著差异。(P>0.05)3.2卵巢不同级别浆液性腺癌中KLF4蛋白表达情况卵巢低级别腺癌组和高级别腺癌组,KLF4蛋白的强阳性表达率分别为34.8%和16.7%,统计分析表明,低级别组和高级别组中KLF4蛋白的强阳性表达率无显著差异。(P>0.05)3.3卵巢不同级别浆液性腺癌中P21蛋白表达情况卵巢低级别腺癌组和高级别腺癌组,P21蛋白的强阳性表达率分别为26.1%和11.9%,统计分析表明,低级别组和高级别组中P21蛋白的强阳性表达率无显著差异。(P>0.05)4 SP1、KLF4和P21蛋白的表达与卵巢不同级别浆液性腺癌患者预后的关系4.1卵巢不同级别浆液性卵巢癌的生存率比较卵巢低级别腺癌组3年和5年生存率分别为:69.2%和30.8%,卵巢高级别腺癌组3年和5年生存率分别为:35.5%和9.7%。统计分析表明,低级别组和高级别组的3年生存率和5年生存率均有显著差异。(P<0.05)4.2 SP1蛋白的表达与卵巢不同级别浆液性腺癌预后的关系在卵巢低级别腺癌组,SP1强阳性组与SP1阴性或弱阳性组相比其3年生存率(42.9%,100.0%)和5年生存率(0.00%,66.7%)差异均有统计学意义(P<0.05)。在卵巢高级别腺癌组,SP1强阳性组与SP1阴性或弱阳性组相比的3年生存率(22.7%,66.7%)和5年生存率(0.00%,33.3%)均有显著差异(P<0.05)。4.3 KLF4蛋白的表达与卵巢不同级别浆液性腺癌预后的关系在卵巢低级别腺癌组,KLF4强阳性组与KLF4阴性或弱阳性组相比的3年(75.0%,66.7%)和5年生存率(50.0%,22.2%)均无显著差异(P>0.05)。在卵巢高级别腺癌组,KLF4强阳性组与KLF4阴性或弱阳性组相比的3年(85.7%,20.8%)和5年生存率(42.9%,0.00%)均有显著差异(P<0.05)。4.4 P21蛋白的表达与卵巢不同级别浆液性腺癌预后的关系在卵巢低级别腺癌组,P21强阳性组与P21阴性或弱阳性组相比的3年(100%,60.0%)和5年生存率(66.7%,20.0%)均无显著差异(P>0.05)。在卵巢高级别腺癌组,P21强阳性组与P21阴性或弱阳性组相比的3年(100.0%,25.9%)和5年生存率(50.0%,3.7%)有显著差异(P<0.05)。5 SP1、KLF4和P21在卵巢不同级别浆液性腺癌中表达的相关性分析在卵巢低级别浆液性腺癌中SP1高表达与KLF4、P21的低表达无显著相关性(P>0.05),KLF4的低表达与P21的低表达之间差异无统计学意义(P>0.05);在卵巢高级别浆液性腺癌中SP1与KLF4、P21的表达呈显著负相关(P<0.05),KLF4与P21的表达呈显著正相关(P<0.05)。6卵巢不同级别浆液性腺癌的COX多因素生存分析为进一步确定影响卵巢浆液性腺癌的预后因素,将Kaplan-Meier单因素生存分析筛选出的预后相关因素:SP1的高表达,KLF4的低表达、P21的低表达、手术病理分期、化疗方式、术后残余癌灶大小纳入COX比例风险回归模型进行多因素生存分析,进入COX多因素回归分析的因素可以认为是卵巢浆液性癌预后的独立影响因素。结果显示:在卵巢低级别浆液性腺癌中,SP1的高表达是影响卵巢低级别浆液性腺癌预后的独立影响因素(P=0.016);在卵巢高级别浆液性腺癌中,SP1和临床病理分期进入COX比例风险回归模型,二者为影响卵巢高级别浆液性腺癌患者预后的独立因素(P=0.001,P=0.012)。结论:1在卵巢低级别腺癌和高级别腺癌中,SP1的表达升高,KLF4、P21的表达降低。提示三者参与了卵巢高、低级别浆液性腺癌的发生。2 SP1、KLF4和P21在卵巢低级别和高级别浆液性腺癌中的表达无明显差异,说明卵巢低级别和高级别浆液性腺癌的发生受多因素的调节,可能存在共同的分子基础。3 SP1、KLF4和P21在卵巢高级别浆液性腺癌中的表达呈显著相关,而三者在卵巢低级别浆液性腺癌中的表达无明显相关。4在高级别浆液性腺癌中,SP1高表达和KLF4、P21的低表达均是影响患者预后的因素,在低级别浆液性腺癌中,只有SP1的高表达是影响患者预后的危险因素。多因素生存分析结果显示SP1的高表达可能是影响卵巢高、低级别浆液性腺癌预后的独立因素。