针刺对MCAO大鼠侧脑室注射5-硫D-葡萄糖、环孢菌素A后微血管内皮细胞转运功能的影响

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目的:通过研究针刺对MCAO大鼠侧脑室注射5-硫D-葡萄糖、环孢菌素A后微血管内皮细胞转运功能的影响,探讨针刺是否通过影响微血管内皮细胞的Glut-1和P-gp的表达,减轻缺血后神经细胞的损伤,保护缺血脑组织。为针刺治疗脑缺血性疾病提供实验及理论依据。方法:线栓法阻断Wistar大鼠大脑中动脉制成局灶性脑缺血模型(MCAO)。侧脑室内微量注射Glut-1、P-gp阻滞剂。使用电针治疗仪在内关穴进行刺激;用NSS神经体征评分法于大鼠术后1d、7d进行评分;采用激光多普勒血流仪监测第7天大鼠软脑膜微循环。检测实验后脑组织谷氨酸、乳酸、丙酮酸、Ca2+及皮质、海马、丘脑等不同脑区葡萄糖的含量;石蜡切片,HE染色,观察海马神经细胞的形态变化;运用免疫组化方法对海马CA1区微血管内皮细胞Glut-1、MDR1编码的P-gp进行了研究。结果:结果显示针刺可促进MCAO大鼠神经体征的恢复;针刺可以明显改善MCAO大鼠海马CA1区微循环血流量;降低脑组织中的谷氨酸、乳酸、Ca2+及乳酸/丙酮酸的比值,升高丙酮酸及皮质、海马、丘脑等不同脑区葡萄糖的含量;针刺能够增加大鼠海马CA1区微血管数目,促进神经细胞的修复。免疫组化结果显示,针刺可明显提高脑缺血后海马CA1区微血管内皮细胞Glut-1表达,缓解能量衰竭;MDR1编码的P-gp针刺后的表达也显著增多,从而发挥其外排泵的作用,保护脑组织。侧脑室内注射Glut-1和P-gp阻滞剂,icv 5-SDG后针刺组软脑膜微循环血流量比icv NS后升高,神经体征评分,丙酮酸、乳酸、葡萄糖的含量较icv NS后降低;icv CsA后针刺组神经体征评分、软脑膜微循环血流量,谷氨酸、乳酸、Ca2-的含量均比icv NS后升高。结论:针刺可以改善MCAO大鼠海马CA1区微循环血流量,上调微血管内皮细胞Glut-1和MDR1编码的P-gp表达,减轻缺血后神经细胞的损伤;icv 5-SDG、CsA后对针刺的效果没有确切的抑制作用,说明虽然5-SDG、CsA能够阻滞Glut-1和P-gp的功能,但对针刺改善MCAO大鼠缺血脑功能的恢复无明显抑制作用,说明尚不能证实Glut-1和P-gp是针刺改善脑缺血功能的关键环节,其机制有待进一步深入研究。
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