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胍基乙酸(guanidineacetic acid,GAA)是动物合成肌酸的唯一前体物,在动物能量代谢中具有积极意义。胍基乙酸对畜禽生产的影响及其可能的作用机制有较广泛的研究。GAA对牛、羊等反刍家畜的生产作用主要体现为提高牛羊增重、饲料转化效率,但是,目前对其作用机制的研究结果仍不能很好地解释GAA产生的促增重、提高饲料转化效率的作用。因此,有必要继续针对GAA影响动物代谢作用机制开展深入研究。本文以生长期绵羊为研究对象,研究外源添加GAA对瘤胃代谢、小肠养分流量、小肠吸收以及肝脏肌酸合成、肌肉肌酸代谢等的影响及其可能的作用机制,丰富GAA代谢理论,为GAA在绵羊生产中的应用提供科学理论基础和技术支持。试验I:饲粮添加胍基乙酸对绵羊血浆、尿液中胍基乙酸相关代谢物含量的影响试验探究补喂胍基乙酸(GAA)对绵羊采食前后血液、尿液胍基乙酸相关代谢产物的影响。选取健康、3月龄平均体重为(27.35±0.58)kg的哈萨克公羊12只,按体重分为对照组和GAA组(n=6/组)。GAA组参考已报道研究结果,在每千克基础饲粮中添喂1000 mg/kg胍基乙酸,进行饲喂试验。结果表明,1)与对照组相比,GAA组绵羊采食后0~12 h血浆GAA含量均值显著升高(P<0.05)。GAA组绵羊采食后8 h血浆肌酸含量显著升高(P<0.05)。2)与对照组相比,GAA组肌酐尿液排出量极显著升高(P<0.01)。因此,在本研究条件下,饲粮中添加GAA能够提高绵羊血浆胍基乙酸和肌酸含量,增加尿液中肌酐的排出量,表明绵羊能够利用外源胍基乙酸。试验Ⅱ:饲粮添加胍基乙酸对绵羊瘤胃代谢和十二指肠养分流量的影响试验探究GAA是否在瘤胃中降解,以及在多大程度上被降解,并探究GAA对绵羊瘤胃代谢和进入十二指肠养分流量的影响。选取安装有瘤胃瘘管、十二指肠近端瘘管体重为(34.29±1.95)kg的5月龄哈萨克公羊24只(n=6/组)。试验羊只饲喂无肌酸和胍基乙酸的基础饲粮,每组在每千克基础饲粮中添加0、550、1100和1650 mg/kg胍基乙酸。采用非同位素标记物(Li,Cr-EDTA)法进行食糜流通量的测定,探讨补喂胍基乙酸对绵羊瘤胃胍基乙酸流通量和瘤胃代谢以及进入小肠养分的影响。结果表明,饲粮中添加550~1650 mg/kg DM GAA,GAA瘤胃通过率为54%~85%。增加了瘤胃液氨氮水平(P<0.05),线性增加瘤胃液p H值(Linear,P<0.05),与0 mg/kg组相比,采食后2 h随着饲粮GAA含量的升高绵羊瘤胃液乙酸浓度线性降低(P<0.05)。瘤胃液丙酸浓度550 mg/kg组和1650 mg/kg组在绵羊采食0 h、2 h和0~8 h均值显著降低(P<0.05)。瘤胃液丁酸含量在采食0 h、4 h、8 h和0~8 h平均值1650 mg/kg组显著上升(P<0.05)。总VFA含量在1650 mg/kg组采食后4 h显著上升,550 mg/kg组在采食后6 h显著下降(P<0.05)。线性增加了进入小肠总还原糖含量(Linear,P<0.05)。试验Ⅲ:饲粮添加胍基乙酸对绵羊生长性能和机体肌酸代谢的影响试验探究饲粮添加胍基乙酸对绵羊生长性能、胍基乙酸的吸收和肌酸相关代谢的影响。选取3月龄、体重相近(27.35±0.58)kg、健康的哈萨克公羊24只,随机分为4组(n=6/组),试验羊只饲喂无肌酸和胍基乙酸的基础饲粮,每组在每千克基础饲粮中添加0、550、1100和1650 mg/kg胍基乙酸。结果表明,1)与0 mg/kg组相比,绵羊试验期1~45 d平均日增重随着饲粮GAA水平呈现线性升高(P<0.05),其中1650 mg/kg组达到显著水平(P<0.05),1650 mg/kg组绵羊颈静脉血浆INS和IGF-I显著升高(P<0.05)。颈静脉血浆GAA和肌酸含量随着饲粮中GAA水平的升高而线性升高,1100 mg/kg组和1650 mg/kg组均达到显著水平(P<0.05)。46~100 d和1~100d的GAA添加组DMI显著降低(P<0.05),平均ADG、F:G均差异不显著(P>0.05)。颈静脉血浆GAA含量随着饲粮中GAA水平的升高呈现二次变化趋势(P=0.10),550 mg/kg组最高。2)随着饲粮GAA水平的升高门静脉血浆GAA含量呈现二次变化(Quadratic,P<0.05)。与0 mg/kg组相比,550 mg/kg组和1100 mg/kg组门静脉胍基乙酸显著升高(P<0.05)。1650 mg/kg组空肠黏膜SLC6A6和SLC6A8 m RNA相对表达水平显著下降(P<0.05),回肠黏膜组织SLC6A8 m RNA相对表达水平显著下降(P<0.05)。肝静脉血浆肌酸水平呈二次变化,550 mg/kg组最高(Quadratic,P<0.05)。试验IV:饲粮添加胍基乙酸对绵羊食糜和门静脉血浆氨基酸和葡萄糖含量的影响本试验测定饲粮胍基乙酸对绵羊小肠食糜养分和门静脉养分含量的变化。探究饲粮胍基乙酸对绵羊氨基酸和葡萄糖吸收的影响。试验设计同试验Ⅲ。结果表明,1)随着饲粮添加胍基乙酸水平的上升,小肠食糜碱性氨基酸(包括精氨酸、组氨酸、赖氨酸)含量线性上升(Linear,P<0.05),小肠食糜总酸性氨基酸和天冬氨酸含量呈二次变化(Quadratic,P<0.05)。食糜可溶性非必需氨基酸和总氨基酸含量线性上升(Linear,P<0.05)。随着饲粮添加胍基乙酸含量的上升,门静脉血浆总碱性氨基酸、赖氨酸含量随着饲粮添加胍基乙酸水平的上升呈二次变化(Quadratic,P<0.05),其中550 mg/kg组最高,0 mg/kg组最低。门静脉血浆必需氨基酸含量呈现二次变化(Quadratic,P<0.05),其中均为0 mg/kg组含量最低,1100 mg/kg组含量最高。门静脉血浆总氨基酸含量具有二次变化趋势(Quadratic,P=0.05),其中550 mg/kg组最高,0 mg/kg组含量最低。2)与0 mg/kg组相比,回肠食糜可溶性葡萄糖含量1100 mg/kg组和1650 mg/kg组显著降低(P<0.05)。1100 mg/kg组和1650 mg/kg组门静脉血浆葡萄糖含量显著上升(P<0.05)。试验V:基于转录组的饲粮添加胍基乙酸对绵羊小肠黏膜基因表达影响的研究本试验利用转录组分析技术,分析饲粮添加胍基乙酸对小肠黏膜基因表达的差异的影响,探究胍基乙酸作用于小肠黏膜的作用机制,进一步丰富胍基乙酸调控绵羊小肠吸收转运和代谢的理论基础。根据试验Ⅲ的研究结果,选取试验Ⅲ研究中的0 mg/kg组和550 mg/kg组,利用转录组学分析技术,对两组小肠(十二指肠、空肠、回肠)黏膜进行差异表达分析。结果表明,550 mg/kg组GO分析十二指肠显著的条目是ATP酶活性(MF),回肠显著条目:DNA依赖的ATP酶活性(MF)(P<0.05,Padj<0.05)。十二指肠差异基因涉及通路显著变化的有:抗叶酸耐药性、ABC转运、胆汁分泌(P<0.05,Padj<0.05)。空肠DEGs涉及通路显著的有:视黄醇代谢、戊糖和葡萄糖醛酸盐的相互转化、叶酸生物合成(P<0.05,Padj<0.05)。综上所述,饲粮中胍基乙酸的添加量在550~1650 mg/kg时,胍基乙酸在绵羊瘤胃的通过率为54%~84%。饲粮中添加胍基乙酸可提高进入绵羊十二指肠的还原糖流量和小肠食糜氨基酸含量,改善小肠ATP酶功能活性和能量代谢,促进小肠必需氨基酸的吸收,提高绵羊循环血液中的肌酸水平,刺激胰岛素和IGF-I的分泌,促进生长期羔羊的生长。