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研究背景肾癌,又称’肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC),起源于肾小管上皮细胞,是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一。每年全世界肾癌死亡病例超过100000例,占所有恶性肿瘤的2%-3%,其中肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma)是肾癌最常见的类型,大致占肾癌总发病数的80%。寻找特异性高的肾癌分子标记物对于其早期诊断、靶向治疗及预后判断具有非常重要的意义。SPOP (speckle-type POZ protein)是利用硬皮病病人的抗血清,从Hela细胞的cDNA文库中筛选出来的新型抗原,其编码的蛋白质分子量为47×103道尔顿,亚细胞结构呈核内散点分布,它作为E3泛素连接酶CUL-3的接头分子,通过BTB/POZ结构域与CUL-3相结合,并通过MATH结构域聚合底物蛋白,从而在蛋白质的泛素化和降解中起着重要作用。目前已发现的可以通过CUL/SPOP复合体进行泛素化的底物包括PDX-1, MacroH2A, Daxx以及Gli2, Gli3等,同时,SPOP自身也可以作为底物进行泛素化修饰和降解。近年来,SPOP与多种肿瘤发生及演进的关系越来越受到重视,SPOP在肿瘤的发生、演进中可能发挥多方面的作用,其机制较为复杂,是研究肿瘤机理的一个重要因子。然而在国内尚未有SPOP在人肾透明细胞癌细胞及组织中表达的相关研究报道。研究目的研究SPOP在人肾透明细胞癌细胞株A498及KRC/Y、人原代肾癌细胞、人肾透明细胞癌组织及正常肾组织中的表达情况;并初步探讨SPOP表达与人肾透明细胞癌病理分化程度的关系。研究方法人肾透明细胞癌细胞株A498及KRC/Y由山东大学第二医院徐大为教授惠赠。人肾透明细胞癌组织来源于山东大学第二医院泌尿外科2010年10月-2011年9月肾癌患者手术标本,正常对照来源于同一肾脏,距肿瘤边缘5cm以上(所取标本均经过伦理委员会批准和患者知情同意),所有患者术前均未行放化疗。所取肾癌组织一部分经0.25%胰蛋白酶消化,调整至合适密度(5×105个/m1)种植至纤维连接蛋白包被培养瓶培养人原代肾癌细胞。采用免疫细胞化学方法检测人肾透明细胞癌细胞株A498、KRC/Y及病人来源的原代肾癌细胞中SPOP蛋白的表达情况。所取肾癌患者手术标本另一部分经固定后采用HE染色诊断肿瘤病理分级,分别采用免疫组织化学方法、Western蛋白印迹法定性及定量检测人肾透明细胞癌及正常肾组织中SPOP蛋白的表达水平。采用spss13.0统计软件进行结果分析,行方差分析及t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)人肾透明细胞癌细胞株A498及KRC/Y传代后,制备细胞爬片后经免疫细胞化学染色后显微镜下观察,SPOP在肾癌细胞株A498及KRC/Y中均呈阳性表达。人肾透明细胞癌组织传代后,制备细胞爬片后经免疫细胞化学染色后显微镜下观察,SPOP在原代肾癌细胞中呈阳性表达。(2)24例肾透明细胞癌经HE染色后显微镜下观察,14例高分化、5例中分化、5例低分化肾透明细胞癌;11例正常的肾组织经病理诊断均为正常肾脏组织。经免疫组织化学染色,SPOP在14例高分化、5例中分化及5例低分化肾透明细胞癌中均为阳性表达,11例正常肾组织均为阴性。。肾透明细胞癌中SPOP蛋白的表达水平(0.7038±0.1443)高于正常肾组织(阴性)的表达水平(P<0.05),差异有统计学意义;SPOP蛋白在高分化肾透明细胞癌(0.7068±0.1525)、中分化肾透明细胞癌(0.6342±0.1750)及低分化肾透明细胞癌(0.7648±0.0526)中的表达水平之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论(1) SPOP在人肾癌细胞株A498、KRC/Y、人原代肾癌细胞中均呈阳性表达。(2)SPOP在人肾透明细胞癌组织中为阳性表达,正常肾组织中SPOP表达为阴性。SPOP在不同分化程度肾透明细胞癌中表达差异无统计学意义。