本研究旨在建立禽组织(鸡肌肉、鸡肝脏、鸡肾脏、鹅肌肉、鸭肌肉)、鸡蛋、鸭蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)及猪肉中青霉素G残留气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法。本试验以海扬黄鸡、高邮鸭、扬州鹅和三元(杜×长×大)杂交猪为试验素材,采用加速溶剂萃取(ASE)和固相萃取(SPE)技术提取净化目标物,建立并优化禽组织、禽蛋和猪肉中青霉素G残留的GC-MS/MS检测方法。主要研究结果如下:1.建立并优化了青霉素G和三甲基硅烷基重氮甲烷(TMSD)衍生反应的条件,并确定衍生产物。即量取1.0μg/mL青霉素G100 μL,加入400μLTMSD于2.0mL棕色离心管中,密封,置于30℃烘箱中避光反应30min,生成青霉素G衍生产物,即青霉素G三甲基硅甲酯。2.首次采用ASE提取禽组织、鸡蛋、鸭蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)、猪肉中的青霉素G残留,并对ASE的参数(温度、时间、冲洗百分数)进行了优化,即在1500psi,30℃条件下,冲洗百分数40%,正己烷脱脂,0.2 M磷酸盐缓冲溶液(pH 8.0)提取禽组织及猪肉中的青霉素G残留,80%乙腈提取鸡蛋、鸭蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)中的青霉素G,静态提取5min,提取2次。此方法提取效率高,样品基质影响小、重复性好,节省试剂,自动化。3.首次建立和优化禽组织、鸡蛋、鸭蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)及猪肉中青霉素G残留的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)检测方法。采用EI模式,全扫描(Full SCAN)定性,Auto SRM结合外标法定量。结果如下:空白禽肉(鸡肌肉、鹅肌肉、鸭肌肉)、猪肉和禽蛋(鸡蛋、鸭蛋)中青霉素G的添加浓度在定量限(LOQ)～200.0μg/kg范围内,衍生产物定量离子对m/z 174.1>114.1*的峰面积与添加浓度呈现良好的线性关系,决定系数R2≥0.9994;空白鸡肝脏和鸡肾脏中青霉素G的添加浓度在定量限(LOQ)～250.0 μg/kg范围内,衍生产物定量离子对m/z 174.1>114.1*的峰面积与添加浓度呈现良好的线性关系,决定系数R2≥0.9993。空白样品中青霉素G添加浓度为LOQ、0.5 MRL、1.0 MRL和2.0 MRL时,禽组织和猪肉中青霉素G的添加回收率为80.67%～96.18%;日内相对标准偏差(RSD)为2.05%～4.52%、日间RSD为2.87%～5.36%;检测限(LOD)为1.50～4.10μg/kg(S/N≥3);定量限(LOQ)为4.50～8.20μg(S/N≥10)。鸡蛋、鸭蛋(全蛋、蛋清、蛋黄)中青霉素G的添加回收率为80.31%～94.50%;日内RSD 为 2.13%～4.82%、日间 RSD 为 2.74%～6.13%;LOD 为 1.70～3.20 μg/kg(S/N≥3)、LOQ 为 6.10～8.50 μg/kg(S/N≥10)。综上所述,本试验选择安全稳定的TMSD为衍生试剂;采用ASE提取方法,优化样品前处理过程,提高提取效率;建立禽组织、禽蛋及猪肉中青霉素G残留的GC-MS/MS方法,定性、定量准确,灵敏度高。方法学验证参数均满足中国农业农村部和欧盟兽药残留检测要求。