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本研究以苯酚、双光气和6-氨基正己酸为原料合成了半抗原6-(苯氧基羰基)氨基-1-己酸(HA);以3-甲基苯酚、双光气和3-氨基丙酸为原料合成了半抗原B-(间-甲基苯氧基羰基)氨基丙酸(HB)。HA用活泼酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到通用免疫原HA-BSA,结合比为42:1;HA和HB用活泼酯法分别与卵清蛋白(OVA)偶联得到包被抗原HA-OVA和HB-OVA,结合比依次为23:1和17:1。
以芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂通用免疫原HA-BSA免疫BALB/c小鼠,经多次免疫后检测小鼠血清效价并选择效价较高的小鼠,应用杂交瘤技术,用PEG法将其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经ELISA法筛选及有限稀释法亚克隆化,建立可稳定分泌抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂的杂交瘤细胞株。结果获得了三株可稳定分泌抗芳香类氨基甲酸酯农药的杂交瘤细胞株(20-G8、3-E2和23-E5),所分泌的抗体均为IgM、κ型,亲和常数分别达2.15×108L/mol,1.43×108L/mol和8.04×107L/mol。其中细胞株20-G8所分泌的抗体对混灭威、灭除成、灭杀成、甲萘威等芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂具有明显的识别作用,为建立该类农药的多残留分析奠定了基础。
以成功制备的杂交瘤细胞株20-G8所分泌的抗芳基-N-甲基氨基甲酸酯类杀虫剂单克隆抗体为基础,通过对检测体系中盐离子强度、pH值、有机溶剂等影响因子的研究建立了混灭威、灭除威、灭杀威以及甲萘威的ELISA检测体系.以Logit(B/B0)作纵坐标与农药浓度的对数值作横坐标建立标准曲线,混灭威在0.001μg/L～100μg/L,范围内呈显著线性关系,检测方程为y=-0.9573x-0.3176,相关系数R2达0.9943,在自来水,土壤以及青菜中的添加回收率分别为101.6％、87.7％和90.4％；灭除威在0.001μg/L～100μg/L范围内呈显著线性关系,检测方程为y=-0.9185x-0.1698,相关系数R2达0.9954,在自来水、土壤以及青菜中的添加回收率分别为108.8％、84.6％和92.2％；灭杀威在0.01μg/L～100μg/L范围内呈显著线性关系,检测方程为y=-0.9647x+0.0305,相关系数R2达0.9944,在自来水、土壤以及青菜中的添加回收率分别为97.2％、84.2％和90.9％；甲萘威在0.01μg/ml～100μg/ml范围内呈显著线性关系,检测方程为y=-0.9094x-0.2513,相关系数R2达0.9955,在自来水、土壤以及青菜中的添加回收率分别为101.6％、87.4％和94.5％。