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急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合症(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome ALI/ARDS)是一种以肺实质弥漫性炎症为特征的疾病。随着现代呼吸支持技术的进展,ALI/ARDS患者的死亡率仍在40%以上,因此寻求新的抑制肺部炎症损伤的药物,一直成为人们关注的焦点。氧化介导的组织损伤是ALI/ARDS的重要发病机制。使用乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine ,NAC)、L-2-oxothiazolidine-4-carboxylate (OTZ, 半胱氨酸前体物质)和维生素E等抗氧化剂,在动物模型及临床试验中均显示出可以改善ALI/ARDS的部分病理生理指标,如心脏指数和PaO2,提示抗氧化剂对ALI/ARDS有一定的保护作用。ɑ-硫辛酸(ɑ-lipoic acid,LA)是一种代谢性抗氧化剂,因此推测LA对ALI/ARDS可能存在一定的保护作用。目前尚未发现LA在ALI/ARDS中应用的相关报道。本课题拟通过LA干预ALI/ARDS动物模型,观察其有无对ALI/ARDS保护作用。目 的本实验的目的是通过观察代谢性抗氧化剂LA干预内毒素(lipopolysaccharide LPS)诱发的SD大鼠ALI/ARDS模型,观察病理生理的变化,探讨LA在ALI/ARDS治疗中的应用前景。方 法一、LPS诱发SD大鼠ALI/ARDS模型复制采用内毒素(Escherichia coli 0111:B4)6mg/kg尾静脉注射诱发SD大鼠造成ALI/ARDS模型。二、硫辛酸干预LPS诱发SD大鼠ALI/ARDS模型的病理生理参数影响LPS诱发SD大鼠建立ALI/ARDS模型,于LPS注射后30min以不同剂量LA(10mg/kg、30mg/kg、100mg/kg)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)分别自尾静脉注射,于LPS注射后1h、2h、4h和6h分别测定大鼠PaO2、血清脂过氧化物水平、BALF中细胞计数和蛋白浓度,肺W/D比,血清和BALF中 TNF-α,死亡大鼠生存时间,以及肺组织的病理表现及超微结构变化,评价LA对内毒素诱发<WP=5>SD大鼠ALI/ARDS模型的保护作用。结 果1.LPS诱发SD大鼠ALI/ARDS模型复制结果。予以大鼠LPS6mg/kg尾静脉注射后与生理盐水组相比,PaO2进行性下降,PaO2从1h(75.69±11.01 mmHg)到6h(57.97±15.74 mmHg)均明显下降,统计学有显著差异(P<0.01)。脂过氧化物进行性增高,从1h(218.6±24.31 U.CARR)到6h(367.4±46.41 U.CARR)均明显增高,统计学有显著差异(P<0.01)。肺湿干比进行性增高,从1h(4.48±0.09)到6h(4.82±0.09)均明显增高,统计学有显著差异(P<0.01)。BALF中蛋白浓度进行性增高,从1h(0.324±0.05mg/ml)到6h(0.835±0.1mg/ml)均明显增高,统计学有显著差异(P<0.01)。细胞计数进行性增高,1h(4.4±0.77×107/L)到6h(9.35±1.48×107/L)均明显增高,统计学有显著差异(P<0.01)。血清TNF-α浓度从1h(1.018±0.38 ng/ml)到6h(0.096±0.021ng/ml)均明显增高,峰值在1h,统计学有差异(P<0.05)。BALF中TNF-α浓度从1h(0.259±0.04 ng/ml)到6h(0.429±0.05ng/ml)均增高,峰值在6h,1h和6h统计学有显著差异(P<0.01)。光镜下表现:肺泡结构破坏,较多肺泡萎陷,肺出血,肺泡内见大量红细胞,肺间质水肿,肺泡隔增宽,肺泡间质见大量炎症细胞和蛋白样物渗出。2.硫辛酸干预LPS诱发SD大鼠ALI/ARDS模型的病理生理参数动态变化。予以LA(100mg/kg)干预组与LPS组相比,PaO2从1h(92.96±9.56mmHg)到6h(87.38±3.93mmHg)均明显增高,统计学有显著差异(P<0.01)。脂过氧化物从1h(126.6±28.74 U.CARR)到6h(187.2±24.35 U.CARR)均明显减低,统计学有显著差异(P<0.01)。肺W/D比从1h(4.34±0.05)到6h(4.49±0.08)均明显增高,统计学有显著差异(P<0.01)。BALF中蛋白浓度从1h(0.310±0.09 mg/l)到6h(0.390±0.05 mg/l)减少,4h和6h有统计学有显著差异(P<0.01)。BALF细胞计数1h(3.63±0.80×107/L)到6h(4.65±0.90×107/L)均明显增高,4h和6h有统计学有显著差异(P<0.01)。血清TNF-α浓度从1h(0.024±0.016 ng/ml)到6h(0.061±0.021 ng/ml)均明显减低,峰值在2h时间点(0.34±0.088 ng/ml),统计学有显著差异(P<0.01)。BALF中TNF-α浓度从1h(0.17±0.02 ng/ml)到6h(0.309±0.05ng/ml)均明显减低,1h和6h统计学有显著差异(P<0.01)。LA<WP=6>干预后,肺组织少有灶性出血,仍可见炎症细胞。肺间质水肿,肺泡隔增宽,炎症细胞浸润、出血较LPS组明显减轻。予以大鼠LA100mg/kg尾静脉注射后与GSH组相比,PaO2增高,但无统计学意义(P>0.05)。脂过氧化物从1h(126.6±28.74 U.CARR)到6h(187.2±24.35 U.CARR)均明显减低,统计学有显著差异(P<0.01)。肺湿干比减低,但无统计学意义(P>0.05)。4h后BALF中蛋白浓度、细胞计数明显减低,两组间有显著差异。血清TNF-α浓度均减低,于2h、4h的时间点两组均有显著差异(P<0.01)。BALF中TNF-α有减低,但无统计学意义。3.观察一周时间,内毒素组死亡大鼠生存时间4.94±2.43小时,LA干预后死亡大鼠生存时间14.38±3.36小时。结 论1.予以大鼠LPS注射后,PaO2明显下降,肺泡结构破坏,较多肺泡萎陷,肺出血,肺泡内见大量红细胞,肺间质水肿,肺泡间质见大量炎症细胞和蛋白样物渗出。提示ALI/ARDS模型复制成功。2.予以大鼠LPS静注后,大鼠的脂过氧化物水平明显增高,提示内毒素诱发的ALI/ARDS模型中存在氧化应激;LA干预后,脂过氧化物水平明显减低,说明LA具有明显的抗氧化作用。3.LA干预可明显改善LPS诱发的ALI/ARDS大鼠的PaO2,?