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本文将从酵母中克隆的coxⅣ基因和DsRed、GFP和YFP等荧光蛋白基因融合,用于标记花粉管中的线粒体,将GFP-FABD2基因和GFP-MAP4基因分别用于标记微丝和微管。将三种标记基因分别转染烟草得到转基因花粉或利用基因枪瞬时转染野生型烟草花粉,并结合药物处理实验,研究花粉管中线粒体的分布、运动和与细胞骨架的关系。
烟草花粉管细胞和一般的烟草细胞相比,线粒体的分布和运动都有很大差别。利用线粒体活体染料标记烟草BY-2细胞,结果显示烟草BY-2细胞中有核周线粒体、外周线粒体和胞质线粒体,各自具有特定的空间排布。而花粉管中除极顶端外,均有线粒体的分布,并无明显的核周线粒体和胞质线粒体之分,亚顶端区线粒体密度最高,中部和基部分布均匀。大多数BY-2细胞中线粒体做震荡式运动,从整体上看,位移无明显变化。少数线粒体快速运动的细胞中,线粒体具有四种运动方式。从整体上来看,花粉管细胞中线粒体沿生长轴运动,顶端线粒体的运动速度比中部和基部慢。
烟草花粉管中大部分线粒体和微丝共定位,微丝解聚后,线粒体运动完全停止,分布发生明显变化,大多数线粒体仍分布于解聚的微丝片段上。微管解聚后,线粒体运动没有停止,但顶端线粒体分布却发生明显变化。这表明,烟草花粉管中线粒体的运动依赖于微丝,其分布则依赖于微丝和微管。Myosin的抑制剂NEM处理使线粒体发生聚集,同时解聚微丝,线粒体则聚集成球状团块,且随时间的延长而增大。微管解聚后,NEM使线粒体聚集成微丝状。Myosin ATPase的特异性抑制剂BDM也使线粒体也发生聚集。微管解聚后,线粒体聚集成类似微丝的形态,微丝解聚后,线粒体聚集成类似微管的形态。NEM和BDM处理的结果进一步表明,微丝的聚合和myosin的活性都是烟草花粉管中线粒体运动的必要条件。微管可能对线粒体的定位或附着起一定的作用。所以,烟草花粉管中线粒体的运动依赖于完整的F-actin-myosin系统,而其分布则是微丝和微管相互协调共同作用的结果。