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目的:为了研究急性淋巴细胞白血病硫嘌呤类药物耐药的机制,我们建立了由6-MP和6-TG诱导的急性淋巴细胞白血病耐药细胞系,并运用全外显子测序、细胞分子学和代谢组学等方法,初步研究其耐药机制。方法:分别用6-MP和6-TG浓度递增给药的方法诱导人急性淋巴细胞Reh,建立了耐药细胞系Reh-6MPR和Reh-6TGR;通过药敏实验、凋亡实验和DDR相关标记物的蛋白印迹实验来检测耐药细胞的耐药程度;生长曲线和细胞周期分析来鉴定耐药细胞的生长特性;全外显子测序方法检测耐药细胞中相关基因突变情况;LC/MS方法检测耐药细胞中药物代谢和嘌呤代谢的变化;Western blotting检测耐药细胞中蛋白表达;慢病毒感染细胞的方法过表达耐药细胞中目的蛋白的表达。结果:成功建立了由6-MP诱导的稳定耐药细胞系Reh-6MPR和由6-TG诱导的稳定耐药细胞系Reh-6TGR,相对亲本Reh细胞,Reh-6MPR对6-MP和6-TG的耐药程度增加了959和1161倍,Reh-6TGR对6-MP和6-TG的耐药程度增加了699和956倍;Reh-6MPR和Reh-6TGR对6-MP和6-TG的凋亡率明显下降;6-MP和6-TG处理Reh-6MPR后,DDR的标记物γ-H2AX（S139）,P-CHK2（T68）和凋亡标记物PARP-cleaved未有明显变化;耐药细胞系的生长速度较Reh细胞变慢;与亲本Reh细胞相比,Reh-6MPR和Reh-6TGR细胞中6-MP和6-TG有聚集现象,并且其代谢产物TIMP和TGMP明显减少;测序结果显示Reh-6MPR和Reh-6TGR细胞中参与硫嘌呤类药物代谢的关键酶次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1（HPRT1）发生了同一位点的突变,mRNA碱基序列第495号和496号之间插入了一个腺嘌呤（A）,氨基酸序列从第165位后发生移码编译（p.V165fs）;13C5,15N4-Hypoxanthine标记嘌呤补救通路代谢,结果显示Reh-6MPR和Reh-6TGR细胞中13C5,15N4-IMP（IMP-labeled）含量减少,提示HPRT1活力明显下降;嘌呤代谢产物Hypoxanthine、IMP、AICAR和Inosine的含量明显增加;在耐药细胞Reh-6MPR中过表达野生型HPRT1基因,可提高其对6-MP和6-TG的敏感性。结论:耐药细胞系Reh-6MPR和Reh-6TGR中HPRT1的突变V165fs可导致其活力下降,并引起白血病细胞对6-MP和6-TG耐药的发生,导入HPRT1-wt基因可改善其对6-MP和6-TG耐药程度。