刚第弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种世界范围内广泛流行的专性细胞内寄生的人畜共患寄生虫病。首次发现在1908年,因其速殖子呈弓形而得名。猫科动物是其已知的唯一中间宿主,所有的温血动物都可以作为其中间宿主。弓形虫在人类上主要发生在免疫抑制人群中(HIV患者和器官移植患者等),成年人无症状,孕妇会引起流产或产智障儿,在儿童中主要是引起弓形虫眼病和弓形虫脑病。目前全球范围内对水产品弓形虫感染的研究十分少,而我国这样的一个水产品的大国,至今仍然没有相关的研究。为了建立一种简便、快速、准确的水产品弓形虫检测方法,来检测中国东南沿海水产品的弓形虫的感染情况,本实验首先对弓形虫国际标准强毒株RH株和CN猪株的核糖体DNA内转录间隔区ITS-1序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析,以期找到一种合适的遗传标记建立一种能够用于水产品检测的PCR方法。结果发现CN株和RH株的ITS-1序列完全一致,且与GenBank上注册RH株的ITS-1序列也完全一致。从而验证了可以用弓形虫ITS-1序列作为遗传标记而建立弓形虫特异性PCR检测方法的可行性。随后本研究以弓形虫ITS-1序列为种特异性遗传标记,通过对PCR各组分以及PCR程序的逐一摸索建立了特异的弓形虫PCR检测方法。采用有限稀释法稀释弓形虫速殖子DNA,经PCR扩增,检测该方法的敏感性。用同一引物扩增牡蛎、鸡、虾、鱼、大肠杆菌、鸡球虫、虾皮下及造血组织坏死杆状病毒和弓形虫速殖子基因组DNA,检测PCR方法的特异性。该PCR方法最低可以检测500龟弓形虫速殖子DNA(相当于5个速殖子的DNA)。牡蛎、鸡、虾、鱼、大肠杆菌、鸡球虫、虾造血与组织坏死病毒基因组DNA均未扩增出条带,仅弓形虫基因组DNA出现特异性条带。从而表明该方法具有很好的特异性和敏感性,适用于弓形虫的检测。随后本研究采用已经建立的PCR检测方法对中国部分地区的太平洋大牡蛎(Crassostrea gigase)、克氏原螯虾(Procambarus clarkii)、斑节虾(Penaeus monodon)、鲫鱼(Carassius auratus)、黄鳝(Monopterus albus)等淡、海水产品共1849份进行了弓形虫检测。其中牡蛎、斑节虾、鲫鱼和黄鳝的检测结果全为阴性。仅在618只克氏原螯虾中检测到4例弓形虫阳性,总阳性率为0.6472%,且这4例阳性全部来自于江西省南昌市,该地的阳性率为2.5%。结果显示克氏原螯虾可以通过滤食的方法来富集周围环境中的弓形虫卵囊。其作为人类和水生动物弓形虫病的潜在传播途径还有待于进一步的研究。