纳米TiO2对冬虫夏草菌生长影响及机理研究

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冬虫夏草是我国一种传统的名贵中药,具有极其重要的药用价值。近年来由于天然冬虫夏草过度采集,已经濒临灭绝危险。供不应求的矛盾促使人们寻找天然虫草的替代物,冬虫夏草无性型的分离和高效发酵是有效途径之一。本论文首先研究了实验所用冬虫夏草菌的固体培养特征,测定了液体发酵有效成分;其次通过固体及液体培养研究了纳米Ti02对冬虫夏草菌形态、生物量、活性成分的影响,并优化了提高生物量的发酵条件;最后,初步探究了纳米TiO:影响冬虫夏草菌生长的机理。冬虫夏草菌菌丝体无色,平滑或具微疣,有隔膜。多见无柄产孢细胞单生于营养菌丝的顶端或作为侧枝几乎呈直角伸出,产孢细胞系瓶形小梗,无色,平滑或具微疣,针形,逐渐向上尖削成一狭窄的颈部。分生孢子无色,无隔膜,肾形或长椭圆形。形态观察结果显示本研究所用冬虫夏草菌与文献报道的中国被毛孢相似。纳米Ti02培养基上菌株生长速度快于无纳米Ti02培养基(基础组培养基)上菌株;两组培养基上菌落褶皱形成时间、隆起高度、细胞分泌物颜色的深浅都不一致;光学显微镜下,纳米Ti02固体培养基上菌丝体比基础培养基上菌丝体粗壮,’且孢子含量丰富均匀的散落在菌丝体周围;扫描电镜观察,纳米Ti02培养基中的菌丝体丰满粗壮,分生孢子无隔膜,平滑,均匀的粘附在产孢细胞上。观察发现两者菌丝体、分生孢子形态不一致。纳米Ti02提高冬虫夏草菌丝体生物量;对菌丝体多糖产量没有明显的影响,但影响多糖的分子量分布;提高冬虫夏草菌丝体中虫草酸含量;对菌丝体虫草素产量没有明显影响;对冬虫夏草菌丝体中水溶性蛋白和总氮含量没有明显影响。单因素实验优化了液体发酵。确定最适纳米Ti02浓度为1mg/mL;纳米Ti02条件下优化的最佳发酵条件是接种量10%、发酵时间8d、发酵初始pH值6.0以及发酵转速150r/min,最佳碳源、氮源、无机盐分别是蔗糖、酵母浸膏、KH2PO4和MgSO4。纳米TiO2影响冬虫夏草菌生长的机理初探表明,菌丝体生长过程中,纳米Ti02影响蛋白质的合成代谢,改变菌丝体不同蛋白的相对含量。
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