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目的研究5种蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)亚型PKC alpha(α)、PKCbeta(β)、PKC gamma(γ)、PKC delta(δ)和PKC epsilon(ε)在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)株ES-D3细胞定向诱导分化为神经样细胞过程中的时空表达变化,探讨PKC信号对ES细胞定向诱导分化中发育基因(pax-6、slit-2、netrin-1)表达的影响,试图发现PKC调控ES细胞定向分化为神经细胞的分子机制.方法ES-D3细胞株用普通ES细胞培养液培养,应用经典的4-/4+法,经胚胎体(embryoid bodies,EBs)阶段后,用5×10<-7>M维甲酸(retinoic acid,RA)诱导,用NSE和NF-200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后第4天用免疫组织化学,在诱导后第1、3、5、7和14天用Western印迹和逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法来检测PKC亚型的表达变化;用RT-PCR方法测定细胞的发育基因的mRNA表达情况,并观察了PKC激活剂佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和抑制剂D-鞘氨醇对它们表达的影响.将PKCα cDNA正义和反义真核表达载体质粒,应用脂质体Lipofectin转染ES-D3细胞,经Western印迹等检验,成功构建了稳定过表达和表达反义PKCα的ES-D3细胞模型,观察PKCα亚类对发育基因表达的影响.结论(1)PKC<,α>、PKC<,β>、PKC<,γ>、PKC<,δ>和PKC<,ε>在ES细胞定向神经分化中有非常独特的时空表达特点,对进一步研究细胞分化有重要的意义.(2)发育基因pax-6和netrin-1在ES细胞定向分化为神经样细胞中同样有非常重要的作用,可能是通过PKCα的信号通路起作用.