单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)属于α型疱疹病毒,主要感染人类的皮肤、口、唇及生殖器的皮肤黏膜,对人类健康造成极大威胁。HSV具有两个血清型,即单纯疱疹病毒I型(HSV-1)和单纯疱疹病毒II型(HSV-2)。HSV-2的生殖器感染是很常见的性传播疾病,近年来,医学界的一些研究表明,HSV-2感染可能与宫颈癌等疾病的发生有关系,同时还能显著增加HIV病原体(human immunodeficiency virus)的传播。因此HSV-2阴道感染疾病得到了广泛的重视。Brincidofovir又称CMX001,是一种新型广谱抗DNA病毒药物,是西多福韦的膦脂衍生物,对疱疹病毒、腺病毒、天花病毒、巨细胞病毒、EB病毒、JC病毒等DNA病毒都有很好的抗病毒作用。与西多福韦相比具有抗病毒作用强、肾毒性小,给药途径广等优势,是目前很有潜力的抗病毒药物。凝胶剂是近年来在制剂领域开发的一种新型制剂,是指药物与适宜的辅料制成的均一、混悬或乳剂型的乳胶稠厚液体或半固体制剂。常用于局部给药,应用于阴道的凝胶剂多为水性凝胶剂。凝胶剂在治疗HSV-2阴道感染时具有直接作用于病灶、使用方便、依从性好、黏附性好,不易流出等特点,是较为适合阴道给药的剂型。目前,CMX001凝胶剂在国内外均无文献报道。本文对CMX001凝胶剂进行了研究,主要用于皮肤或粘膜的病毒感染的治疗,该研究主要涉及内容如下:研究目的:通过处方筛选及制备工艺优化制备出安全、有效、稳定、可控的CMX001凝胶剂,用于皮肤或粘膜的病毒感染的治疗,并对制得的CMX001凝胶剂进行质量研究、稳定性研究及初步药效学评价。研究内容:(1)处方前研究:首先对CMX001的理化性质进行研究,包括性状、熔点、溶解度、CMX001在不同溶剂中的溶解度以及在不同pH的磷酸盐缓冲液中的饱和溶解度的研究。(2)处方及工艺研究:凝胶剂的处方通常由凝胶基质、保湿剂、抗氧剂、防腐剂、乳化剂等辅料组成,可根据实际情况增加其他的辅料。因此,对处方及工艺采用了三个步骤进行研究,第一步:进行处方基质的筛选以确定凝胶剂的组成,首先对水性凝胶基质进行筛选,常见的水性凝胶基质有天然树胶类、纤维素衍生物类、乙烯聚合物类、丙烯酸树脂类,每类基质选取1-2种具有代表性的基质参与筛选,制备出不同种类的空白凝胶基质,以外观、黏度、涂布性、制备工艺等为评价指标,选出较为合适的凝胶基质。然后将其他成分也进行筛选初步确定处方的组成。第二步:优化处方,以凝胶剂的外观、黏度和释放度为评价指标,在初步确定的处方基础上进行正交设计,采用正交设计综合平衡法选出最优处方。第三步:进行制备工艺研究及其优化,接下来按照确定的处方及工艺制备三批cmx001凝胶剂。(3)cmx001凝胶剂的质量研究:对三批cmx001凝胶剂进行质量研究,包括:外观、黏度、ph值、装量差异、鉴别、有关物质、含量和释放度,根据《中国药典》2015版通则进行测定,对有关物质、含量、释放度进行方法学的建立和验证。(4)cmx001凝胶剂的稳定性研究:进行cmx001凝胶剂的外观稳定性试验、影响因素试验、加速和长期试验。外观稳定性的研究主要是观察cmx001凝胶剂的外观在离心、高温、低温的条件下是否发生变化;影响因素试验、加速和长期试验根据《中国药典》2015版通则进行。(5)初步药效学研究:体外药效学研究以vero细胞为宿主建立hsv-1和hsv-2的病毒感染模型,以阿昔洛韦为阳性对照,测定cmx001的ic50值。体内药效学研究是以阴道感染hsv-2的balb/c小鼠为动物模型,以3%阿昔洛韦乳膏为阳性对照,测定0.05%、0.1%和0.5%cmx001凝胶剂对病毒的抑制作用。综合实验动物的外观、阴道局部感染症状和全身症状进行评分,同时测定感染3天后的阴道病毒滴度,综合评价cmx001凝胶剂的治疗作用。研究结果:(1)处方前研究:本品化学药名:p-[[(1s)-2-(4-氨基-2-氧-1(2h)-嘧啶基)-1-(羟甲基)乙氧基]甲基]单[3-(十六烷氧)丙基]磷酸酯,为白色结晶性粉末,熔点为191~194℃之间,分子量为561.7,分子式c27h52n3o7p。cmx001在甲醇中微溶,在乙醇中极微溶,在乙酸乙酯、三氯甲烷、水、0.1m盐酸溶液中均不溶,在0.1m氢氧化钠溶液中易溶。cmx001在ph4.5、5.5、6.5、7.5的磷酸缓冲液中的饱和溶解度分别为0.06mg/ml、0.11mg/ml、4.91mg/ml、24.94mg/ml。(2)处方及工艺研究:通过处方的筛选、优化以及工艺研究,确定了最终的处方及制备工艺流程。cmx001凝胶剂(按1000g计)的制备过程为:称丙二醇50g,丙三醇75g,乙二胺四乙酸二钠0.2g于300ml水中,充分溶解混匀;称卡波姆974p10g,将粉末均匀分散撒在上述混合液面上,密封,室温溶胀24h;称氢氧化钠4g于200ml水中,溶解混匀,配制成2%的氢氧化钠溶液;称cmx00110g于2%的氢氧化钠溶液中,溶解混匀,并将其缓慢加入溶胀混合物中,边加入边搅拌;分别将10g苯甲醇、2g吐温-80、75g无水乙醇加入并搅拌均匀;补加水,至处方总重量为1000g。(3)cmx001凝胶剂的质量研究:所制备的三批凝胶剂均为外观透明均一的半固体凝胶剂。ph值均为6.5-7.5;黏度均为50-60pa·s。实际装量均大于理论装量的93%,符合规定。紫外-可见分光光度法鉴定时于275±2nm波长处有最大吸收,于250±2nm波长处有最小吸收,高效液相色谱法鉴定时与cmx001对照品的出峰时间相同。采用高效液相色谱法对三批样品的有关物质进行了测定,测定前进行方法学建立,滤膜吸附试验证实滤膜对有关物质的测定没有影响,进样精密度rsd值为1.78%,重复性rsd值为1.37%,测试液在24h内稳定,回收率的平均值和rsd值分别为99.97%和1.35%,线性方程为y=6.6886x-0.2700(r=1.0000),在0.30ug/ml-11.98ug/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系,均符合要求;经测定三批样品的有关物质含量分别为0.170%、0.172%、0.168%。对三批样品的含量进行了测定,测定前进行方法学建立,滤膜吸附试验证实滤膜对含量的测定没有影响,进样精密度rsd值为0.27%,重复性rsd值为0.14%,测试液24h内稳定,回收率的平均值和rsd值分别为98.26%和0.39%,线性方程y=7370.7486x+69.1168(r=0.9999),在0.24-0.84mg/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系,均符合要求;按此法测定的三批样品含量分别为98.61%、98.70%、98.35%。利用紫外-可见分光光度法对三批样品的释放度进行了测定,测定前进行方法学建立,选用ph7.4的磷酸盐缓冲液作为释放液,标准曲线方程为a=0.013c-0.001(r=1),在4μg/ml~80μg/ml浓度范围内浓度与吸光度值呈现良好的线性关系,测试液72h内稳定性良好,方法精密度rsd值为0.72%,回收率的平均值和rsd值分别为100.19%和0.73%,均符合要求;按此法对三批样品的释放度进行了测定,结果表明在1h、6h、12h、24h、48h的释放度分别约为10%、31%、45%、55%、65%。(4)cmx001凝胶剂的稳定性研究:三批凝胶剂在离心和高温条件下,外观没有变化,但在低温条件下凝胶剂有白色物质析出;三批样品在影响因素条件下放置10天,含量和有关物质均无明显变化;在加速和长期试验条件下分别放置6个月,三批样品的外观、黏度、ph值、含量、有关物质和释放度均没有明显变化。(5)初步药效学研究:在vero细胞中,cmx001对hsv-1和hsv-2的ic50值分别为0.073μm和0.070μm;在小鼠阴道感染模型中,cmx001凝胶剂的治疗效果优于阳性对照药物,其中0.5%的cmx001凝胶剂的治疗效果最好。研究结论:制备出了cmx001凝胶制剂,该凝胶剂的处方及制备工艺较为合理。凝胶剂的质量可控,经检测外观、黏度、装量差异、ph值、含量、有关物质和释放度均合格。在密闭、避光、常温的条件下运输和储存6个月性质稳定,注意防冻、避免接触强碱、强酸、强氧化性的物质。cmx001在体内外均对单纯疱疹病毒有较强的抑制作用。综上,本研究制备的cmx001凝胶剂安全、有效、稳定、可控。