目的在体外组织培养液中加入ZVAD-fmk、L-NAME用于保存同种异体骨软骨组织一定时间，观察其是否具有提高软骨细胞成活率、保持软骨组织活性的作用，进而探索具有提高软骨组织保存效果的培养液成分。材料与方法以羊膝关节骨软骨为研究标本，无菌条件下，用自制取软骨器获取同样大小的骨软骨块270枚，包括软骨下骨全长约5mm，直径约为4.5mm，PBS液冲洗3遍，随机分配到A组、B组、C组三个不同培养液成分的无菌培养瓶中进行保存，分别为A组(对照组）：基础保存液，B组：基础保存液中添加50uMol/L的ZVAD-fmk，C组：基础保存液中添加15mg/L的L-NAME。基础培养液成份为99%EMEM培养液和1%的青链霉素（各100UI/ml）。在4℃、每隔两天换液的条件下，分别于保存第1、21、35天每瓶取出30块进行检测，包括EB/FDA双荧光法测软骨细胞存活率，Annexin V-FITC与PI双染色法测定软骨细胞凋亡率（流式细胞仪定量检测），软骨组织番红-O染色。结果第1天时,三组细胞成活率均保持在90%以上，各组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。三组细胞凋亡率凋亡率均在5%左右，差异不具有统计学意义（P＞0.05）。软骨基质番红-O染色IOD值均在190左右，三组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。第21天时,三组软骨细胞成活率均出现下降，其中A组(基础保存液)下降明显，C组（基础保存液中+L-NAME）次之，B组（基础保存液+ZVAD-fmk）仍能保持在85%，三组间差异有统计学意义(P<0.05)。各组细胞凋亡率均有上升，以其中C组最为明显，三组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。各组软骨IOD值均有下降，B组较高，C组次之，A组最低。各组之间差异比较具有统计学意义（P<0.05）。第35天时，各组成活率均出现下降，其中A组(基础保存液)、C组（基础保存液中+L-NAME）下降明显，已经降至50%以下。B组（基础保存液+ZVAD-fmk）仍能保持在70%以上，且三组间差异比较有统计学意义(P<0.05)。各组凋亡率均出有上升，其中A组(基础保存液)、C组（基础保存液中+L-NAME）上升明显，已经升至70%。B组（基础保存液+ZVAD-fmk）仍能保持在25%左右，且各组间差异有统计学意义(P<0.05)。三组软骨IOD值均继续下降，其中B组软骨IOD值仍能保持在60以上，而其他两组则下降明显，三组间差异比较有统计学意义(P<0.05)。结论在基础保存液中添加50uMol/L的ZVAD-fmk，能够有效提高体外液体保存的异体软骨组织活性以及软骨细胞存活率；在基础保存液中添加15mg/L的L-NAME，没有提高体外保存的异体软骨组织活性以及软骨细胞存活率。意义关节软骨全层缺损的修复方法与效果不佳一直是困扰临床运动医学医生与骨科医生的一大难题。虽然，国外临床上异体骨软新鲜骨移植治疗全层软骨损伤取得了肯定的效果，其优点为取材相对容易、无需二次手术等，但由于没有理想的体外液体保存软骨移植物的方法，影响了临床应用与推广。因此，延长同种异体软骨移植物的体外保存时间并保持其活性成为学者研究的焦点。本课题研究发现组织体外培养液中加入ZVAD-fmk具有保持软骨细胞成活率以及组织活性的作用，为下一步研究理想的组织培养保存液奠定了基础。