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奶牛乳腺炎是世界奶牛业的主要危害因素之一,它不仅影响产奶量,造成经济损失,而且影响牛奶的品质,危害人类的健康。而无乳链球菌是引起奶牛乳腺炎的常见病原微生物之一,因而是乳业关心的主要问题。建立无乳链球菌快速检测方法,对于提高奶制品质量与安全,推进奶牛业发展,促进人类健康意义重大。本研究克隆表达了三种无乳链球菌表面蛋白(Rib,Sip, Alpha),并分别进行了抗体制备,为无乳链球菌快速检测试纸条和多价疫苗的研制奠定了良好的基础。本实验首先将6种血清型的ATCC无乳链球菌标准菌进行了活化,并分别提取了基因组DNA。根据Rib, Sip, Alpha三种表面蛋白基因序列设计特异性引物,以不同标准菌株基因组DNA为模板,分别扩增得到长度为453bp、1302bp和699bp的片段,将片段克隆连接至pMD18-T载体进行序列测定,结果表明获得的片段为正确的目的基因。将rib和sip基因片段亚克隆至重组表达载体pET26b、alpha基因片段亚克隆至重组表达载体pGEX-4T-1,并利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示3种基因均能够重组表达,外源蛋白的分子量分别为18kDa、61kDa和52kDa,与预期大小相符,但是其中Rib和Alpha形成包涵体。将3种基因进行大规模重组表达并对形成的包涵体进行变性、复性后,利用亲和纯化获得了纯度较高的目的蛋白。经过质谱鉴定,3种外源蛋白与与无乳链球菌Rib,Sip以及Alpha的相似度分别达到99.99%,100%以及100%。将三种蛋白分别免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体,经测定抗体效价分别为480000：1,640000：1以及320000：1。利用3种抗血清,分别采用间接ELISA方法对ATCC标准菌进行检测,结果显示3种多克隆抗体均体现出一定亲和性和特异性。