目的探讨CIK细胞的培养及体外增值方法,观察CIK细胞体外增值的规律并对其进行表型分析。方法从健康志愿者肘静脉抽取外周血,密度梯度离心,分离出单个核细胞(PBMC),将该细胞种植于CD3单克隆抗体及包被的细胞培养瓶中。然后在培养基里加入重组人IFN-γ、IL-1α和IL-2。第0天、第3天、第6天、第9天、第12天、第15、第18天和第21天时分别用抗人CD3-FITC,抗人CD56-PE标记CIK细胞,然后上流式细胞仪进行测定CD3+、CD56+细胞比例结果CIK细胞在最初的三天增殖相对缓慢,至第15天增殖速度达到顶峰,随着培养时间的延长,CD3CD56双阳性的比例逐渐升高。结论CIK细胞体外培养方法可靠,具有明显的活性,随着时间的延长,CIK细胞的倍增明显。目的:将培养成功的CIK细胞与人肝癌细胞共培养,分析CIK细胞对人肝癌细胞增殖、凋亡以及克隆形成的影响,更好地为临床治疗HCC提供实验依据。方法:将CIK细胞分别与三种人肝癌细胞系(Hep G2,Hep3B和Huh7细胞)在同一培养体系内共同培养24h及48 h。采用流式细胞术对CIK细胞的表型进行分析,CCK-8法检测人肝癌细胞的增殖情况。通过软琼脂平板细胞克隆形成实验分析人肝癌细胞的克隆形成能力,使用Annexin V-PI双染法检测肝癌细胞的凋亡情况。RT-PCR法和Westen blotting法分别检测凋亡分子Bax和Caspase-3的m RNA及蛋白水平表达情况。结果:体外培养的CIK细胞可明显抑制三种肝癌细胞系的生长,克隆形成能力减弱,导致肝癌细胞系的凋亡(凋亡细胞比例增加,凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达水平升高),并且对Hep G2肝癌细胞系的抑制效果较Hep3B和Huh7两种肝癌细胞系更加明显。结论:在体外,CIK细胞能明显抑制肝癌细胞的增殖,促进癌细胞凋亡,且该细胞增殖与凋亡诱导具时间依赖性。