光甘草定在真菌性角膜炎中的抗炎作用

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目的:研究光甘草定(Glabridin,GLD)对真菌性角膜炎的抗炎作用及其作用机制。方法:本研究分别从GLD对烟曲霉菌感染细胞的促炎细胞因子和模式识别受体(Pattern Recognition Receptor,PRRs)表达的影响以及在烟曲霉菌感染的小鼠角膜组织和腹腔巨噬细胞引起巨噬细胞极化的作用这两个方面来验证GLD在真菌性角膜炎中发挥抗炎的作用。1.在体外细胞实验中,为研究GLD对真菌感染细胞炎症因子(IL-1β、TNF-α)、PRRs(TLR2、TLR4、Dectin-1)的m RNA和蛋白表达的影响,将人角膜上皮细胞(Human Corneal Epithelial Cells,HCECs)、小鼠腹腔巨噬细胞和小鼠腹腔中性粒细胞在GLD(16μg/m L)与灭活烟曲霉菌菌丝(浓度为1×108cfu/m L)共同培养8小时后收集12孔板细胞,提取m RNA用于Real-Time PCR(RT-PCR)实验,培养24小时后用酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)和蛋白质印迹法(Western Blot)分别对6孔板细胞炎症因子和PRRs的蛋白表达量进行检测。2.将烟曲霉菌角膜炎小鼠模型随机分为GLD治疗组和PBS处理组,利用流式细胞术检测各组小鼠角膜CD206+和CD86+巨噬细胞含量,从而明确两组间M2/M1巨噬细胞比例的差异。收集小鼠腹腔巨噬细胞,分为空白对照组、烟曲霉菌处理组和烟曲霉菌+GLD处理组,利用流式细胞术检测各组CD206+和CD86+巨噬细胞含量,从而明确各组间M2/M1巨噬细胞比例的差异。3.将烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型随机分为GLD治疗组和PBS处理组,收集感染三天的小鼠眼球并制备角膜切片,使用过碘酸希夫染色(Periodic acid Schiff staining,PAS)显示两组小鼠角膜水肿程度和菌丝负荷并进行比较。结果:1.实验结果显示,单纯烟曲霉菌刺激组三种细胞的炎症因子(TNF-α、IL-1β)、PRRs(TLR2、TLR4、Dectin-1)的m RNA和蛋白的表达较对照组和GLD组相比明显上调,烟曲霉菌+GLD组中上述炎症细胞因子与PRRs的m RNA和蛋白质表达量与烟曲霉菌组相比明显下降。2.流式细胞术实验结果显示,烟曲霉菌感染的小鼠角膜和小鼠腹腔巨噬细胞中,GLD处理组与其他组相比M2/M1巨噬细胞比例均增高。3.PAS染色显示,GLD治疗组小鼠角膜基质水肿程度较PBS处理组明显减轻,角膜上皮排列更加整齐、平整,且真菌菌丝明显减少。结论:GLD在烟曲霉菌性角膜炎中具有抗炎作用,GLD抑制PRRs(TLR2、TLR4、Dectin-1)和炎症因子(TNF-α、IL-1β)的表达,介导巨噬细胞向M2型极化来发挥抗炎作用。并且能够减轻烟曲霉菌角膜炎的水肿程度、促进角膜上皮修复和降低菌丝负荷。
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