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目的：近年来大量的研究表明高同型半胱氨酸血症与很多种疾病相关，特别是心脑血管的栓塞性疾病。血液中同型半胱氨酸的浓度已被认为是这类疾病的一个新的独立危险因素，并成为研究这类疾病的病因及预防等方面的一个新的热点。本课题旨在建立一种适合于常规临床实验室大量检测同型半胱氨酸样品的竞争ELISA的试验方法。 方法：竞争法ELISA是基于利用S—腺苷同型半胱氨酸水解酶催化同型半胱氨酸与腺苷缩合成S—腺苷同型半胱氨酸。通过检测S—腺苷同型半胱氨酸的浓度来反映血液中同型半胱氨酸的水平。由于S—腺苷同型半胱氨酸是半抗原，首先是在联接剂的作用下将S—腺苷同型半胱氨酸偶联于牛血清白蛋白。然后以其免疫Balb／c小鼠，用常规方法制备S—腺苷同型半胱氨酸的单克隆抗体，并通过硫酸铵沉淀法、凝胶过滤以及间接法ELISA对抗体进行分离纯化鉴定。通过方阵法确定了S—腺苷同型半胱氨酸与牛血清白蛋白结合物的包被浓度以及抗S—腺苷同型半胱氨酸抗体的工作浓度。进而对包被液的PH值、样本处理时间、该方法的特异性、精密度及可靠性、稳定性进行了检测。并对临床采集的血清样品进行检测所得结果与利用高压液相检测的结果进行了比较。 结果：成功制备了克分子比介于4.47～5.70的硫醚区没有被掩盖的S—腺苷同型半胱氨酸牛血清白蛋白结合物。共筛选出5株杂交瘤细胞。通过试验证实针对S腺苷同型半胱氨酸—牛血清白蛋白结合物而言，pH7.4的磷酸盐缓冲液与pH9.6的碳酸盐缓冲液作为包被液没有明显区别。结合物的包被浓度为2μg／mL。抗S—腺苷同型半胱氨酸的单克隆抗体的工作浓度为1.0μg／mL。样品预处理的时间共计50分钟左右。S—腺苷甲硫氨酸在浓度大于10μmol／L时对该竞争法ELISA具同型半胧氨酸竞争法ELISA检测技术有显著影响。但正常人血液中的S一腺普甲硫氨酸的水平仅为0.1~0.2pmol/L，因此不会影响同型半肤氨酸的测定。分别将经过稳定剂处理过的抗S一腺普同型半肤氨酸的单克隆抗体、HRP标记的羊抗鼠工gG、预包被的酶标板、S一腺昔同型半肤氨酸水解酶置于37℃温度下O、24、48、72、96小时所得的结果均为F<F心，.。。P)0.05无显著性差异。与高压液相方法比较，对二者的结果进行相关性分析，r二0.9863，具有很好的相关性。