解脲脲原体(UU)是一类介于细菌和病毒之间，没有细胞壁，目前能在人工培养基上生长繁殖的最小原核微生物。近年来多项研究证明它与女性泌尿生殖道的非淋菌性尿道炎、子宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎等有关，与围生期的并发症如绒毛膜羊膜炎、流产、早产、低体重儿等亦有密切关系。然而亦有学者认为它属于阴道正常菌群，是一种条件致病菌，多与宿主共存，仅在某些条件下可引起机会性感染，且常合并其他致病原共同致病。 已有研究表明在性成熟无症状的女性下生殖道中UU分离率高达19.08％-60.90％，而怀孕妇女检出率更高，达73％-80％。虽然UU在妇女泌尿生殖道中有很高的分离率，但仅部分妇女出现泌尿生殖道炎症症状。临床中更常对在宫颈分泌物中检测出UU的妇女投入大量抗生素，结果是UU反复出现阳性，称之为“UU耐药”。对于UU阳性的妇女，如何区分感染者和正常携带者，是临床中亟待解决的问题。部分研究提示对于UU的进一步定量和分型是判断感染与携带的关键。 研究认为高定量值的UU与感染有关，但根据何种定量值来判断是感染状态还是携带状态，有没有必要采取治疗措施，这仍有待于进一步的临床研究来进行探讨。UU分为两个生物群和14种血清型，即U.parvum(以前的Biovar1/parvum群，包括血清型1、3、6、14)和U.urealyticum(以前的Biovar2/T960群，包括血清型2、4、5、7～13)。有研究指出由于不同血清型的UU毒力不同，其致病性亦不同，U.urealyticum或某些血清型更容易致病。 UU检测方法包括培养法、免疫学方法和分子生物学方法。实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)属于分子生物学方法，是国外近年发展起来的新的核酸检测技术，具有敏感性好、自动化和程序化、速度快等优点，适合大样本临床应用。 而在UU的分型方法学上，基于抗UU血清型单克隆抗体的血清学分型研究发展最早，但由于抗血清制备繁琐，不同抗血清型的单克隆抗体之间有不同程度的交叉反应，缺乏可重复操作性，在临床上一直未得到广泛应用。目前的热点在基于多条带抗原(MB抗原)基因的UU分群或分型研究。MB抗原是UU的主要外膜抗原，MB抗原基因既包含有血清分群，也包含有各个血清型确定性区域，因而被选择作为特异性目标序列加以扩增。我们根据UU各标准菌株的MB抗原基因间序列差异自行设计引物和探针，使用反相斑点杂交分析法(RDB)对UU进行分型。 研究目的本研究采用FQ-PCR方法进行宫颈分泌物UUDNA检测，了解健康妇女下生殖道UU携带情况和定量值；采用RDB法进行UU血清型鉴定，揭示正常携带状态下UU的血清型分布，以获得健康妇女下生殖道UU血清型的流行病学资料，为其防治和进一步深入研究打下基础。 材料与方法1研究对象选择2005年4月～8月在中山大学附属第二医院体检中心进行体检的妇女，无泌尿生殖道炎症症状，妇科检查阴道粘膜粉红色，白带清白或淡黄色，量少或量中，无明显阴道炎体征，年龄≤55岁。选择符合上述标准者1018例，全部病例详细登记病史，常规妇科检查。 2、荧光定量检测1018例体检妇女用棉拭子取样法采集宫颈管分泌物标本，提取DNA，用PE9700荧光定量PCR仪进行UU、CT荧光定量检测。 3、反相斑点杂交采用RDB法对UU阳性的标本进行分群和血清型鉴定。 4、阳性标本的DNA序列测定临床检测分出血清型的阳性标本，随机抽取18份行DNA测序以证实RDB检测方法的正确性。 结果1、解脲脲原体的荧光定量检测结果1.1健康妇女1018例，UU阳性371例占36.4％(其中UU与CT混合阳性44例占4.3％)，此外，检出CT阳性80例占7.9％。UU阳性、阴性妇女平均年龄比较差异有统计学意义。UU阳性妇女的妊娠次数、流产次数与阴性妇女比较差别有统计学意义。随着妊娠次数、流产次数逐渐增多，UU的阳性率呈逐渐上升的趋势。随着宫颈糜烂程度逐渐加重，UU的阳性率呈逐渐上升的趋势。UU阳性妇女的分娩次数、职业构成及节育措施构成与阴性妇女比较差别无统计学意义。 1.2371例UU阳性标本中，FQ-PCR＜1×106copy/ml319例(86.0％)，FQ-PCR≥1×106copy/ml52例(14.0％)；UU单独阳性327例(88.1％)，UU混合CT阳性44例(11.9％)。下生殖道UUFQ-PCR＜1×106copy/ml的妇女其单独阳性的概率(90.6％)较FQ-PCR≥1×106copy/ml的妇女高(73.1％)；而UUFQ-PCR≥1×106copy/ml的妇女，其混合阳性的概率(26.9％)较FQ-PCR＜1×106copy/ml的妇女高(9.4％)，差别有统计学意义(P=0.000)。 1.3将资料作二分类Logistic回归分析，筛选出对UU阳性有显著性意义的影响因素为：(1)流产次数，1次流产的OR值为1.370，P=0.035；2次流产的OR值为2.462，P=0.000；≥3次流产的OR值为2.734，P=0.005。(2)年龄，OR值为0.969，P=0.001。整个回归模型检验x2=32.777，P=0.000，有统计学意义。 2、解脲脲原体血清型检测结果2.1371例UU阳性标本，可以检测出血清型的共337例，未检出34例，总检出率为90.8％。U.parvum群278例占82.5％，U.urealyticum群30例占8.9％，两群混合阳性29例占8.6％。U.parvum群中血清1型单型别阳性50例(18.0％)，血清3型单型别阳性81例(29.1％)，血清6型单型别阳性111例(39.9％)，血清14型单型别阳性4例(1.4％)，多型别阳性32例(11.5％)。在健康妇女中血清型分布以U.parvum群为主，并且以U.parvum群中的血清1、3、6型单型别为主。 2.2下生殖道UU定量＜1×106copy/ml的妇女，U.parvum群单独阳性率(86.7％)较UU定量≥1×106copy/ml的妇女高(59.6％)；而UU定量≥1×106copy/ml的妇女，U.urealyticum群阳性率(173％)以及两群混合阳性的概率(23.1％)较UU定量＜1×106copy/ml的妇女(7.4％、6.0％)高，差异有统计学意义(P=0.000)。 3、阳性标本的DNA序列测定18份RDB检测阳性标本的测序结果均为相应的UU血清型。 结论1、UU在健康妇女下生殖道中存在无症状的携带状态，UU的阳性率受年龄、妊娠、流产次数等因素影响。 2、在健康妇女中，UU主要表现为UU定量＜1×106copy/ml且UU呈单独阳性，即提示当检测出UU定量＜1×106copy/ml且UU呈单独阳性时，UU属于正常携带状态。 3、健康妇女中UU以U.parvum群占优势，并且以U.parvum群中的1、3、6型的单型别为主，提示U.parvum群，尤其是其中的1、3、6单型别是正常人群携带的可能性较大。