油菜(Brassica napus L.)是一种非常重要的油料作物,是人类食用油、富含蛋白质的动物饲料以及工业生产原料的重要来源。纵观油菜生长发育的整个过程,开花期对生产力至关重要。因此,花期调控是油菜育种的关键目标之一。探索有效控制油菜花期的方法,对现代育种实践具有重要意义。SVP基因(short vegetative phase)通过与开花时间调控网络中的多个基因相互作用,在控制植物花期发挥着非常重要的作用。所以该基因可作为油菜早熟育种的潜在调控目标。在本研究中,我们利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术对BnSVP基因的四个同源拷贝(BnaA04g12990D,BnaA09g42480D,BnaC04g35060D和BnaC08g34920D)进行靶向突变并获得了对应的突变体。含有四个sgRNAs的二元载体(pSH18)的四个sgRNA分别由Pu3b,Pu3d,Pu6＿1和Pu6＿29启动子驱动。通过农杆菌介导的遗传转化成功地将双元载体pSH18转移到甘蓝型油菜纯系J9707中。最终获得了81个独立的转化株系,其中67(82.71%)个株系携带T-DNA插入。我们检测到突变体的突变类型在T1和T2世代中能稳遗传,等位因突变类型在T1和T2世代的平均传递率分别为63.85%和65.77%。此外,还鉴定到两个连续世代无T-DNA插入的突变体。为了探索在本研究中是否发生了脱靶效应,我们对在油菜基因组中推测到的脱靶位点进行了分析检测。S1,S2和S4的预测到的脱靶位点个数分别为8个、5个和4个,但S3则没有预测到脱靶位点。通过基于PCR产物的高通量(Hi-Tom)测序结果进一步分析,这17个潜在的脱靶位点在T0代突变植株里没有发生脱靶效应。在T0代植株中,四个sgRNA诱导突变的效率范围在0%至44.77%之间。这些靶向同一基因的sgRNA在在编辑效率上显示出巨大的差异,例如S1编辑效率为14.92%,S2为44.77%S3为0%,S4为10.44%,这表明sgRNA的选择对于高效获得油菜突变体是非常重要的。BnSVP基因的四个同源拷贝同时突变的植株具有剧烈的早期开花表型变化。通过对无T-DNA插入的纯合突变体植株的观察,在甘肃省从播种到初花期的时间为51.4±2.6天,而在湖北省则为71.9±2.6天。这些时间远比野生型的要短,野生型在甘肃省的时间为86.5±2.1天,湖北省为145.9±2.1天。此外,与野生型相比,纯合突变植株的叶片数显著增加,株高显著降低。我们的研究结果表明,这些突变体在甘蓝型油菜早熟育种改良的应用中具有非常大的潜力