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受体NKG2D属C型凝集素家族跨膜蛋白,广泛表达在NK细胞、CD8~+的αβT细胞和γδT细胞表面。MHC-I类链相关分子A(MHC class I chain-related molecules A, MICA)是人类NKG2D识别的配体之一,应激性表达在一些肿瘤细胞或病原体感染细胞的表面,MICA的可溶性表达可能是导致这些肿瘤细胞“免疫逃逸”的重要原因之一。NKG2D-配体(NKG2DL)产生的活化信号既能直接活化NK细胞,又能以协同刺激的方式促进CD8~+αβT胞的活化。然而,NKG2DL刺激γδT细胞活化的方式目前存在争议。人类γδT细胞主要包括两个亚群:分布在外周血中的Vγ9/δ2T细胞和分布于粘膜上皮组织的Vδ1T细胞,Vγ9/δ2T细胞抗原识别受体(T cell receptor, TCR)可识别小分子磷酸化抗原,Vδ1TCR可识别应激性分子MICA/MICB。 为了研究MICA-NKG2D相互作用在Vγ9/δ2T细胞和Vδ1T细胞活化和效应中的作用机制,我们进行了以下研究:1、从人类外周血中成功克隆了NKG2D的cDNA,并利用pET原核表达系统表达了人NKG2D分子胞外区(80~216氨基酸)的重组蛋白,经纯化复性后获得了高纯度的人rNKG2D蛋白。2、用杂交瘤技术制备rNKG2D分子的单克隆抗体。3、用固相化anti-pan-γδTCR单抗扩增人PBMC,得到纯度达90%以上Vγ9/δ2T细胞;用固相化rMICA蛋白扩增卵巢癌(OEC)患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL),获得纯度为68%的Vδ1T细胞。4、检测anti-NKG2D单抗或rMICA蛋白封闭前后,vγ9/δ2T细胞和Vδ1T细胞对Daudi、HCT-116和HT-29肿瘤细胞的杀伤活性。在效靶比10:1时,anti-NKG2D单抗对Vγ9/δ2T细胞杀伤HCT-116和HT-29细胞的阻断率分别为20%和10%,而rMICA蛋白的阻断效率分别为12%和5%;在相同效靶比下,anti-NKG2D单抗对Vδ1T细胞杀伤HCT-116和HT-29细胞的阻断率分别为42%和35%,rMICA蛋白的阻断率分别为18%和20%。5、构建表达不同形式MICA分子和eGFP融合蛋白的真核表达体系,瞬时转染MICA~-的CHO细胞和Daudi细胞,检测γδT细胞对表达不同形式MICA分子靶细胞的杀伤效率。