论文部分内容阅读
中国卤虫(Artemia sinica)属于节肢动物门(Phylum Arthropoda),甲壳纲(ClassCrustacea),鳃足亚纲(Subclass Branchiopoda),无甲目(Order Anostaca),卤虫科(FamilyArtemiidae),卤虫属(Genus Artemia)。主要分布于我国的山西、西藏、新疆、青海、内蒙等地。对于卤虫的研究我国起步较晚,从80年代初至今在形态学、发育生物学、生态学、资源生物学、遗传学等学科的卤虫研究已有报道。但关于中国卤虫(Artemia sinica)早期发育过程中基因表达的研究很少,还有待于进一步深入细致的研究和分析。本文根据Genbank上美国卤虫orthodenticle、Hunchback基因序列设计引物,以中国卤虫总RNA为模板,经RT-PCR,分别得到了长121bp、376bp的基因片段,经Blastn比对、Clustal X1.83和MEGA4.0软件对该序列的假定氨基酸序列和相近蛋白的氨基酸序列进行分子进化分析,确认该序列是中国卤虫orthodenticle、Hunchback基因的部分序列,并根据这部分序列设计了RCAE引物。并且首次得到了orthodenticle,Hunchback基因的序列全长。使用在线分析软件对orthodenticle、Hunchback基因的假定蛋白的氨基酸序列进行了分析和功能预测。使用整体免疫组化的方法首次确定了orthodenticle、Hunchback基因在中国卤虫不同发育时期的表达部位。并通过半定量PCR粗略的鉴定了orthodenticle、Hunchback基因在中国卤虫不同发育时期的表达量。orthodenticle、Hunchback基因都在中国卤虫的胚胎时期进行表达。orthodenticle基因在头部、胸部和躯干部都有表达。Hunchback基因在拟成虫期的头部、胸部、尾部肛门处以及附肢上都有表达。orthodenticle、Hunchback基因的表达量都随着中国卤虫的不断发育呈现了递减的趋势。推测orthodenticle、Hunchback基因与中国卤虫的体轴发育、体节形成及神经发育有关。