一、目的比较不同植入扭矩值时,BLBⅢ代牙种植体-骨结合的状况,探寻其最佳植入扭矩值,以提高种植体-骨结合率,提高种植手术的成功率,促进国产种植体系统的研制发展完善。二、方法本实验采用拉丁方实验设计及完全随机设计相结合的嵌套实验方法。选择4只1龄以上的健康雄性beagle犬为实验对象,每只犬选取4个实验位点(双侧下颌第二及第四前磨牙),每个实验位点植入两枚种植体,进行种植体植入扭矩值15N·cm(A组),25N·cm(B组),35N·cm(C组),45N·cm(D组)四组实验。按照拉丁方实验设计方法,可以确定每个实验位点的植入扭矩值。按照完全随机设计的实验方法,将16个实验位点平均分为两组即32枚种植体分两次植入:全麻下拔除4只犬的8个实验位点的牙齿进行即刻种植(Ⅰ组);Ⅰ组种植体植入1个月时进行另外8个实验位点的即刻种植(Ⅱ组)。Ⅰ组种植体植入两个月时同时处死4只犬,取带种植体的下颌骨,以进行种植体-骨结合在不同植入扭矩值(A、B、C、D组)时1个月(Ⅱ组)及两个月(Ⅰ组)的临床检查;影像学观察;做带种植体的骨磨片,荧光显微镜下观察种植体-骨界面的结合情况,亚甲基蓝-酸性品红染色后行常规光学显微镜观察,定量组织学分析,获得种植体-骨结合率(BIC)及骨结合指数(OI);标本脱钙切片,行HE染色及BMP-2的免疫组化染色,检测种植体-骨界面的平均灰度值及阳性细胞表达的个数。Ⅰ组与Ⅱ组进行各种观测指标的组间对照,Ⅰ、Ⅱ组内的A、B、C、D组分别进行组间对照,所有数据均输入SPSS13.0软件进行统计学处理,比较种植体-骨结合状况。三、结果(一)、临床检查4只实验犬共32枚种植体术后均无感染,创口愈合良好,去除软组织后,种植体生长良好,未见松动现象,周围无炎症反应。(二)、影像学观察Ⅰ组较Ⅱ组骨质密度更高,种植体-骨组织间未见明显透射影像。Ⅰ组、Ⅱ组成骨以B、C组较好,骨小梁排列整齐、致密,新骨生长活跃。(三)、双色荧光标记测定八个实验组的双色荧光标记条带之间的距离进而计算平均矿化率,进行析因方差分析,Ⅰ组高于Ⅱ组,差别具有统计学意义(P<0.05) ;Ⅰ组、Ⅱ组中B、C组明显高于A、D组,差别具有统计学意义(P<0.01)。(四)、光镜观察Ⅱ组:A、D组种植体周围偶见新生的编织骨和骨髓组织,B、C组种植体周围骨密度明显高于A、D组,形成板层骨。Ⅰ组:成骨能力较Ⅱ组进一步增加,新骨明显增多,骨细胞密集,骨质密度更高。A、D组种植体周围偶见矿化的骨基质。B、C组更多的新生骨组织,板层骨形成,骨小梁结构较为粗大致密且连续性好;种植体周围的骨组织成熟,可见普遍的板层骨和哈弗氏管结构。(五)、定量组织学分析测量各实验组的种植体-骨结合率(BIC)及骨结合指数(OI),进行析因方差分析,Ⅰ组明显高于Ⅱ组,差别具有统计学意义(P<0.01) ;Ⅰ组、Ⅱ组中B、C组明显高于A、D组,差别具有统计学意义(P<0.01)。(六)、免疫组化检测种植体-骨界面的间充质细胞及成骨细胞的胞浆基质中有阳性表达的细胞。检测种植体与骨组织界面的BMP-2的平均灰度均值及阳性表达的细胞个数,进行析因方差分析,Ⅰ组明显高于Ⅱ组,差别都具有统计学意义(P<0.01);Ⅰ组、Ⅱ组中B、C组明显高于A、D组,差别都具有统计学意义(P<0.01)。四、结论(一)、植入扭矩值25N·cm(B组)及35N·cm(C组)更加利于BLBⅢ代牙种植体-骨结合。(二)、荧光标记示踪技术可以很好地反映骨改建的动力学情况,可以作为一种计算种植体周围新骨矿化率的有效手段。(三)、BMP-2是一种重要的有价值的生化指标,用其进行免疫组化实验,检测种植体-骨组织界面的平均灰度值和阳性表达的细胞个数,可以有效地观察界面的骨结合情况。