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水稻稻瘟病是一个世界性的水稻病害,对全世界的粮食安全构成威胁。农药的滥用在一定程度上防治稻瘟病,但也带来了资源以及环境等问题。选育抗病品种是一条合理高效持久的防治方法,研究稻瘟病致病机理以及水稻的抗病机制为选育抗稻瘟病品种提供理论基础。Pid3是一个典型的NLR类基因,该基因及其等位基因对我国西南稻作区的稻瘟病菌小种表现出较广的抗性,暗示其在水稻分子育种中的应用价值。因此探明Pid3的工作机理,有着理论与现实的双重价值。实验室前期的工作中,利用酵母双杂交筛选一个用稻瘟病接种的水稻叶片构建的cDNA文库,寻找在抗病过程中与Pid3相互作用的蛋白。实验室以Pid3的CC(1-157aa)结构域作为诱饵蛋白,筛选到了一个核编码的叶绿体蛋白OsTHF1,本论文主要是以OsTHF1为研究对象,通过验证与Pid3-CC的互作关系,构建相关转基因株系以及对其稻瘟病抗性进行鉴定,初步探索了OsTHF1在Pid3介导的稻瘟病抗性过程中扮演的角色。主要结果如下:1.通过亚细胞定位实验,表明水稻OsTHF1蛋白定位于水稻叶绿体上,并通过Western blot进一步证实了OsTHF1蛋白在叶绿体特异表达。2.通过Y2H、BiFC、LUC等互作研究手段确定了OsTHF1与Pid3-CC互作关系,明确了OsTHF1-CC能够与Pid3-CC产生互作,BiFC实验说明OsTHF1与Pid3-CC的互作场所不在细胞核和叶绿体上。3.通过烟草和水稻原生质体瞬时表达实验,发现Pid3-CC能够诱导细胞死亡。共转Pid3-CC和OsTHF1发现OsTHF1削弱了Pid3-CC诱导的细胞死亡。4.定量PCR实验表明,在表达Pid3的水稻株系中,OsTHF1的转录水平受稻瘟病菌诱导。5.构建了OsTHF1-RNAi/Pid3-OX转基因株系,RT-qPCR和Western blot鉴定筛选出干涉成功的株系,通过一系列病理学实验,发现了干涉掉OsTHF1削弱了Pid3介导的稻瘟病抗性,表明OsTHF1正调控Pid3介导的稻瘟病抗性。6.DAB染色对野生型和转基因株系中稻瘟病诱导的活性氧(ROS)积累进行检测,结果表明TP309感病品种几乎没有ROS产生,而Pid3-OX背景下干涉OsTHF1表达降低了Pid3介导的ROS积累,暗示了OsTHF1可能通过调控ROS积累途径参与了Pid3介导的抗性反应。以上研究结果证明OsTHF1,能够与Pid3-CC相互作用,参与正调控Pid3介导的稻瘟病抗性。