贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)是我国传统中草药,在抑郁、肿瘤、病毒感染、细菌侵染、炎症发生等方面具有重要的治疗作用,这些作用与其含有的多种活性成分有密切关系。褪黑素(Melatonin)作为贯叶连翘中一种重要的活性成分,是迄今发现的最强的内源性自由基清除剂之一,在机体内具有重要的生理作用,它能够改善人的睡眠状态,提高机体的抗氧化、抗衰老能力,提高免疫力等。建立稳定准确的测定贯叶连翘中褪黑素的方法对于研究褪黑素在植物中的作用具有指导意义。已有研究表明褪黑素具有降低糖尿病大鼠血糖的作用,这可能与它具有很强的自由基清除能力有关。糖尿病和氧化应激之间存在一定关联,而抗氧化治疗能够通过减轻机体内氧化应激水平,对糖尿病及其并发症的防治起到一定的作用。选择一种有效的抗氧化治疗药物,并对其作用进行研究,对防治糖尿病与其并发症具有重要的意义。本研究目的在于通过优化褪黑素提取纯化方法,建立准确的褪黑素HPLC检测方法,详细测定贯叶连翘及其提取物中褪黑素的含量,进一步研究贯叶连翘的降血糖作用,探讨贯叶连翘提取物、褪黑素对于糖尿病机体组织中的氧化应激水平的影响和降血糖的效果。论文的主要研究内容如下：1、贯叶连翘中褪黑素测定方法的建立。基于HPLC技术建立了测定褪黑素的方法：采用Phenomenex C18反向色谱柱(规格：5μm,4.6mm×250mm),流动相为含0.2%(v/v)冰醋酸的水溶液、乙腈、甲醇,在30℃下,使用1.0mL/min的流速梯度洗脱,在波长223nm处进行检测。同时优化了褪黑素的提取方法。方法学研究表明,褪黑素进样量在0.1μg-1.5μg范围内时,线性关系良好,建立的方法的重复性好,精密度高,样品稳定性好,加样回收率达到99.6%,RSD为1.86%。通过建立的褪黑素提取纯化和HPLC检测方法,测定了5份野生贯叶连翘及外购贯叶连翘提取物样品,并记录其色谱峰面积,利用线性回归方程计算出样品中褪黑素的含量。2、对贯叶连翘降血糖作用进行研究。将4-6周龄的清洁级昆明雄性小鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病模型组(DM)、阳性药物组(PC)、贯叶连翘提取物组(HYE)和褪黑素组(MT),其中贯叶连翘提取物组及褪黑素组又根据浓度不同各分为低(L),中(M),高(H)三组,每组各10只小鼠。适应性喂养4d后,称体重、测血糖,除NC组外的其他各组小鼠以四氧嘧啶水溶液150mg/kg-BW一次性腹腔内注射0.2mL造成糖尿病模型,NC组腹腔注射等体积超纯水。实验过程中,所有小鼠均自由采食饮水,不给予其他辅助降糖药物,HYE组和MT组分别灌胃相应浓度的贯叶连翘提取物和褪黑素,PC组灌胃等体积药物溶液,NC组和DM组给予等体积超纯水灌胃,每天一次,每次0.2mL,持续3周。3周后,测小鼠血糖,称体重,并处死小鼠,测量各组小鼠的应激指示器官(肝、肾)重量,测量肝、肾组织内抗氧化酶(SOD, GSH-PX, CAT)活性、脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)水平及一氧化氮(NO)含量,一氧化氮合酶(NOS)活性。数据用SPSS软件分析。研究结果表明：1.褪黑素的提取纯化方法良好,检测方法精密、稳定,检测出贯叶连翘中存在较高含量的褪黑素；2.贯叶连翘提取物能降低糖尿病小鼠血糖,缓解糖尿病导致的小鼠体重下降；3.贯叶连翘提取物能缓解糖尿病小鼠肝、肾组织肥大及病变；4.贯叶连翘提取物具有清除自由基的作用,能够提高糖尿病小鼠体内组织中抗氧化酶(SOD、CAT)活性及GSH含量,降低MDA、NO含量,抑制NOS活性。该研究结果可为进一步研究植物中褪黑素的含量变化及作用等奠定基础,为贯叶连翘抗氧化应激损伤的药理作用及糖尿病抗氧化治疗等提供研究资料。