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目的:肺癌在全球范围内已成为最主要的健康问题,是所有癌症中死亡的主要原因。在可手术的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer NSCLC)病人中的25-40%有局部淋巴结单个肿瘤细胞的扩散,并且伴有明显的预后不良。在纵膈镜活检的淋巴结组织中检测扩散的肿瘤细胞能在手术前提高肿瘤分期并为下一步的治疗提供帮助。大多数在淋巴结中检测扩散肿瘤细胞最常用的方法为免疫组化的方法。但这种方法花费的时间长,工作量大,而且结果会因为观察者的不同而有区别。本研究要评价一种简单、客观的在淋巴结中检测扩散的肿瘤细胞的方法: real-time RT-PCR(real time reverse transcriptase polymerase chain reaction)方法。材料和方法:从手术的30例NSCLC病人获得的纵膈淋巴结95组,经常规的组织病理学检查未发现肿瘤细胞,进行real-time RT- PCR检测黑色素瘤抗原基因A(Melanoma antigen gene A,MAGE-A)和角质蛋白19(Cytokeratin 19, CK19) mRNA的表达以发现微小转移的肿瘤细胞。从3例手术的非癌症病人获得纵膈淋巴结8组作为正常对照。用15例肺癌病人原发肿瘤组织作为阳性对照,观察MAGE-A和CK19基因的表达。结果:阳性对照组15个肿瘤标本中有12个表达MAGE-A mRNA, 阳性率为80.0%,其中5个腺癌标本中有3个标本为MAGE-A阳性,3个大细胞癌标本中2个标本为MAGE-A阳性。对于CK19基因的表达,仅有1个肿瘤标本为阴性,为大细胞癌,CK19基因表达的阳性率为93.3 %。在95组经组织病理学检查未发现肿瘤细胞的淋巴结中, MAGE-A mRNA的阳性表达率为17.9 %,其中鳞癌占25.0%,腺癌占6.1%,大细胞癌占22.2%。 CK19 mRNA阳性表达率为28.4%, 其中鳞癌占34.1%,腺癌占21.2%,大细胞癌占27.8%。组织病理学检查22 (73.3%)例病人为pN0期,将MAGE-A和CK19作为标记物用real-time RT-PCR方法在这些病人中发现, 根据MAGE- A的表达,22例pN0期病人有8例(36.4%)上调为pN1-2期,5例pN1期病人中1例上调为pN2期。根据CK19的表达,22例pN0期病人有13例(59.1%)上调为pN1-2期,5例pN1期病人中1例上调为pN2期。3例pN2期病人病理证实无癌细胞扩散<WP=5>的淋巴结MAGE-A和CK19 mRNA的表达均为阳性。10例病人的淋巴结发现同时表达MAGE-A和CK19基因的细胞。在30例NSCLC病人的淋巴结中两种肿瘤标记物的阳性率的比较用X2检验,p值为0.019,小于0.05, 因此两种肿瘤标记物的阳性率有显著性差异。结论:应用real-time RT-PCR检测MAGE-A和CK19 mRNA的表达,是一种在手术的非小细胞肺癌病人的局部淋巴结中发现扩散肿瘤细胞的敏感而特异的方法。多种肿瘤标记物联合应用,既可提高检出淋巴结微小转移的阳性率,也可避免假阳性结果,增加检测的正确率。能否用这种分子生物学方法提高纵膈镜检出的淋巴结分期有待进一步研究评价。