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背景与目的Wnnt信号通路是调控脊椎动物胚胎发育过程的关键信号通路之一,参与了细胞增殖、分化、凋亡及细胞定位控制等一系列生物学过程。既往的文献报道已经证实,Wnt信号通路的异常激活与多种肿瘤的发生、发展密切相关。T细胞因子4 (T cell factor 4, TCF-4)是Wnt信号通路中的重要的调控因子,其沉默或过表达均可引起Wnnt信号通路的调控异常。本研究以T细胞因子4(TCF-4)为研究对象,探索其在胃癌细胞中的表达以及对胃癌细胞增殖及衰老、凋亡中的作用。材料与方法(1)培养人胃癌细胞株MGC803、SGC7901、HSC44-PE、44As3、 MKN45、 NCI-N87,以及永生化人胃黏膜上皮细胞株GES-1,使用Western blot方法比较TCF-4在各细胞之间的表达差异。(2)选取其中TCF-4表达最高的NCI-N87、44As3细胞株与TCF-4表达最低的SGC7901细胞株,分别稳定转染dominant negative TCF-4 (dnTCF-4)及TCF-4全长表达质粒,按照质粒转染说明使用嘌呤霉素(puromycin, PM)筛选出TCF-4调高组细胞SGC/TCF4及 TCF-4调低组细胞N87/dnTCF-4、44As3/dnTCF-4。(3)选取SGC7901、SGC/TCF-4、NCI-N87、 N87/dnTCF-4细胞,建立两组对照：SGC7901 VS SGC/TCF-4、NCI-N87 VS N87/dnTCF-4,采用体外细胞增殖实验及实时无标记细胞检测分析(Real Time Cell Aalysis, RTCA)等技术检测TCF-4对胃癌细胞增殖与凋亡的影响。(4)选取SGC7901、SGC/TCF-4、NCI-N87、N87/dnTCF-4细胞,按照每个35mm培养皿铺5×103个细胞,48h后使用p-半乳糖苷酶试剂盒染色,镜下观察比较SGC7901与SGC/TCF-4细胞、NCI-N87与N87/dnTCF-4细胞的衰老阳性率。(5)取6-8周龄的雌性裸鼠,通过皮下注射的方法,分别注射人胃癌细胞株SGC7901及SGC/TCF-4、44As3及44As3/dnTCF-4,建立胃癌细胞裸鼠移植瘤模型,每周测量肿瘤体积2次,比较观察TCF-4蛋白对胃癌移植瘤生长的影响。结果(1)TCF-4在胃癌细胞中的表达高于对照GES-1细胞,胃癌细胞株按TCF-4的表达量从高到低排列依次为NCI-N87、44As3、HSC44-PE、MGC803、MKN45、 SGC7901。 (2) Western Blot方法验证SGC/TCF-4细胞中TCF-4表达量高于SGC7901,N87/dnTCF-4细胞中TCF-4的表达量低于NCI-N87细胞,44As3/TCF-4细胞中的TCF-4的表达量低于44As3细胞。(3)体外细胞增殖实验及RTCA结果显示N87/dnTCF-4细胞增殖能力明显低于NCI-N87细胞,SGC/TCF-4细胞增殖能力明显高于SGC7901细胞。(4)细胞衰老染色实验结果提示NCI-N87、N87/dnTCF-4、SGC7901、SGC/TCF-4细胞的染色阳性率分别为7.7%、18.7%、8.2%、1.2%。(5)裸鼠成瘤实验结果表明SGC/TCF-4细胞的裸鼠移植瘤体积明显大于SGC7901细胞,44As3/dnTCF-4细胞的裸鼠移植瘤明显小于44As3细胞。结论(1)通过比较永生化的胃粘膜细胞GES-1与胃癌细胞的TCF-4表达量,我们发现相较于正常胃粘膜组织,TCF-4在胃癌细胞中呈高表达,这一结果初步提示TCF-4与胃癌的发生、发展具有一定的相关性。(2)成功地构建TCF-4调高组SGC/TCF-4细胞株及TCF-4调低组N87/dnTCF-4、44As3/dnTCF-4细胞株,并建立裸鼠移植瘤模型,体内、体外实验进一步表明TCF-4能促进胃癌细胞的增殖、抑制胃癌细胞的衰老及凋亡。