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苦荞[Fagopyrum tataricum]为蓼科荞麦属植物，主要产于高海拔地区，其茎、叶、花及种子中均富含黄酮类化合物。研究发现黄酮类化合物具有预防和辅助治疗糖尿病、高血脂和高血压等多种疾病的功效，具有广阔的应用前景。黄酮-3-羟化酶（F3H）是黄酮类化合物代谢途径中的关键酶，属于2-酮戊二酸依赖型双加氧酶家族，在辅助因子2-酮戊二酸、分子氧、铁和抗坏血酸等的辅助下，能够催化柚皮素C3位羟基化，生成二氢山奈素（DHK），进而合成黄酮醇、前花色素苷、花青素等物质。本研究以苦荞种子灌浆期cDNA文库中的黄酮-3-羟化酶基因截短体（truncated Flavanone3-hydroxylase,TrF3H）序列为基础，开展了以下研究：（1）利用生物信息学方法分析了苦荞黄酮-3-羟化酶基因序列，并对其氨基酸序列进行了结构预测及功能分析，并构建了系统发育树。分析结果表明：该基因的完整序列为1369bp，其中编码区序列为1104bp，共编码367个氨基酸。该蛋白质的氨基酸序列与甜荞的黄酮-3-羟化酶的氨基酸序列有83%的相似性。结构域预测发现，F3H蛋白质含有一个高度保守的2OG-FeII-Oxy区域及PLN03176、PLN02515两个保守结构域。本研究成功克隆了639bp的F3H基因编码区序列，其编码C端213个氨基酸，分子量与等点电分别为24.81kD和6.36。（2）以苦荞cDNA文库中克隆的苦荞灌浆期的黄酮-3-羟化酶基因重组质粒pTriplEx2-TrF3H为模板，PCR扩增得到苦荞截短的F3H基因（TrF3H）编码区序列，并将其定向插入原核表达载体pET47b构建了重组质粒pET47b-TrF3H，然后转入大肠杆菌Rosetta plysS（DE3）中进行表达。结果表明：TrF3H以包涵体形式高效表达。（3）对诱导蛋白进行了包涵体复性及纯化，并对重组蛋白的His-tag进行鉴定，结果显示该蛋白N端带有His-tag。（4）钴柱纯化该重组蛋白后，SDS-PAGE电泳并切胶回收目的条带，以高度纯化的重组蛋白为抗原制备多克隆抗体。Western blotting检测结果显示：所制备抗体与原核表达的TrF3H蛋白及苦荞发育期种子的可溶性蛋白杂交出现特异性条带，表明F3H在苦荞的发育期种子中大量表达，且存在于发育期种子的可溶蛋白部分。