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本研究一方面以酸柚、中江柚成熟胚的无菌苗为试材，研究建立柚实生苗高效离体再生系统的最适外植体类型、最佳培养基配方及适宜移栽条件；另一方面以琯溪蜜柚、中江柚成年嫁接树梢尖、带芽茎段为外植体，研究柚嫁接树营养器官离体繁殖的主要调控因素及控制外植体微生物污染的措施，最终建立完整高效适用的柚离体繁殖技术体系。 1 柚实生苗离体再生系统研究结果 （1）成熟胚无菌苗的建立以种胚黑暗培养7—14d有利于幼苗伸长生长。 （2）上、下胚柚及根尖切段在MS+IBA0.25mg／L+BA0.50mg／L+CH200mg／L+Su30g／L培养基上均能直接出芽，但上胚轴出芽能力明显强于下胚轴和根尖切段。外植体在培养基上的放置方式直接影响出芽，上胚轴切段以形态学下端垂直插入培养基（↑）不仅出芽率高（最高可达100.00％），而且出芽早。以上胚轴切段为外植体时，酸柚直接出芽能力明显强于中江柚（出芽率分别是85.70％和20.00％）。 （3）继代增殖培养中，6—BA仍是首选细胞分裂素；以6—BA浓度不超过2.00mg／L为宜，6—BA与KT配合使用效果会更好。最佳培养基配方为MS+IBA0.25mg／L+BA0.10mg／L+KT0.40mg／L+GA30.40mg／L+Su30g／L。以带芽茎段作为外植体，促芽萌发抽梢能力远大于梢尖段外植体（侧芽萌发率分别为96.67％—100.00％和52.92％—73.33％），更有利于增殖培养。 （4）柚不定根诱导分化很困难。诱导生根的基本培养基以1／2MS为宜。采用液体纸桥生根培养不仅有利于外植体不定根的分化和生长，而且还能有效促进植株茎、叶生长。 （5）生根环境和移栽基质对试管苗移栽成活及生长的影响很大。液体生根培养植株移栽到菜园土中70d，成活率可达100.00％，根系和植株伸长生长明显，同时所有植株均萌发新的主根（单株平均新发主根1.75根），87.50％的主根产生形成新的侧根（平均新发侧根4.43根）。 2 柚嫁接树营养器官离体繁殖研究结果 （1）外植体污染率高是影响柚成年嫁接树离体繁殖的主要因素，并且材料木质化程度越高污染越严重。选用化学杀菌剂多菌灵、溶菌灵、万霉灵和百菌清250倍溶液对外植体预处理6h，可使表面污染率从刀．33％降低到13．33％，但它们相互间不宜混合使用。培养基中加入庆大霉素6—20万单位几)或硫酸链霉素Q0—80万单位几)可有效控制外植体内生菌污染（内生菌污染率为 0刀0—16石7％人化学杀菌剂与抗生素配合使用对控制外植体污染和促进芽萌发效果显著，万霉灵u50倍处理6h）＋庆大霉素（20万单位几）的处理组合效果最理想（总污染率为20刀0％，萌芽率为73．33％人 （2）初代培养以自剪期前后至半木质化春梢为最佳外值体。最佳培养基配方为MS＋IBAO．25mg／L＋BAO．50mg／L＋KTO．25 mg／L＋GA30＊0 mg／L＋AgNOs4＊omg／L＋Su30g／L，外植体萌芽率为 99刀5％，丛生芽率为 88．89％，萌梢平均长 1二ocm，并且萌梢生长正常，叶色浓绿。 0）继代培养中细胞分裂素总浓度不宜超过 1刀omg几，IBA浓度范围为 0．10一0．40mg／L。无菌萌梢的最佳培养基为MS＋IBAO．25m＋／L＋BAO．25mm／L＋KTO＊sing／L＋GA30．40mg／L＋Su30g／L，茎段最适培养基为 1／ZMS＋IBAO．20 mg／L＋BAI＊0 mg／L＋GA50．10 mg／L＋Su30g／L。 （4）外植体及其萌梢极易产生疏松、水浸状愈伤组织是制约抽成年嫁接树营养器官离体培养的又一障碍。培养基中加人AgNO。或STS（硫代硫酸银）可明显提高萌梢质量，抑制萌梢产生愈伤组织促其正常生长。AgNO。最适浓度为 10．00 mg几，STS最适浓度范围为 0刀4——0刀6m mol几。