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目的:为探索中医经络学说中原穴与其相应脏腑的蛋白同源性,本实验选取足少阴肾经为示范经脉,探寻其原穴“太溪”与肾脏皮质组织之间的相关物质基础,建立肾经经穴组织蛋白双向凝胶电泳技术并获得经穴组织蛋白指纹图谱数据,以丰富经脉线组织结构研究。
材料与方法:选用健康8周龄雄性wistar大鼠12只,根据随机数字表随机分为空白组(NC)和针刺组(AT)两组,每组6只。每日上午9时,将针刺组大鼠装入布袋,电针刺激双侧“太溪”穴,施以疏密波,频率2Hz,强度以大鼠后肢出现微微抽动,保持安静为度,留针20分钟,每日1次,连续7天。空白组大鼠在相同时间只予钻布袋实验,不予针刺刺激。针刺结束后对所有大鼠用10%水合氯醛(0.4ml/100g)麻醉,冰生理盐水心脏灌流,取出肾脏皮质及“太溪”穴部位和非穴位约1.5×1×0.5mm3结缔组织进行蛋白双向电泳实验,根据重复性原则每组样本平行做三块双向凝胶电泳,对比各组胶图,寻求太溪穴与肾脏皮质组织的相关物质基础。
结果:
1.通过对“太溪”穴组织与非经非穴组结缔组织蛋白比较,发现大鼠“太溪”穴组织与足跟部非经非穴组织胶图存在8完全蛋白差异点。
2.通过对“太溪”穴组织与肾脏皮质蛋白胶图的比较,共发现13对相关蛋白。
3.通过对非经非穴处组织与肾脏皮质之间比较,发现10对相关蛋白。
4.通过“太溪”穴组织与针刺组“太溪”穴组织胶图的比较,可以看出针刺与否的“太溪”穴组织蛋白组成相差较大。
5.通过对针刺组“太溪”穴组织与针刺组肾脏皮质组织蛋白比较,发现20对相关蛋白,且其中之一与“太溪”穴组织和肾脏皮质组织13对相似蛋白之一的分子量、等电点较接近,初步认定此四张胶图中标号蛋白点为同一蛋白。
6.通过对空白组与针刺组肾脏皮质凝胶电泳胶图比较,发现9个蛋白表达变化点,其中包括肾脏皮质胶图中标号202号蛋白点与针刺组肾脏皮质组织胶图中标号为192号蛋白点。
7.肾脏皮质胶图中标号为202号蛋白点和针刺组肾脏皮质胶图中标号为192号蛋白点经质谱验证分析,结果为Zeta crystallin/醌氧化还原酶。
结论:
1.通过对“太溪”穴组织与非经非穴结缔组织蛋白比较,提示穴位组织与非穴组织蛋白组成不尽相同。
2.通过在“太溪”穴组织与空白组肾脏胶图的比较中,共发现13对相关蛋白;而通过对非穴位组织与肾脏皮质之间比较,发现10对相关蛋白,说明原穴“太溪”较非经非穴组织与肾脏皮质有更大的同源性。
3.通过“太溪”穴与针刺组“太溪”穴组织胶图的比较,可以看出针刺与否的“太溪”穴结缔组织蛋白组成相差较大,提示针刺可以使穴位组织蛋白表达含量发生变化。
4.通过对针刺组“太溪”穴结缔组织与针刺组肾脏皮质与“太溪”穴组织和肾脏皮质组织蛋白比较,初步认定有同一蛋白点(已标记于胶图中)同时存在以上四种组织中。
5.通过对肾脏皮质与针刺组肾脏皮质凝胶电泳胶图比较,发现此阳性蛋白点经过电针刺激后,蛋白含量变化显著。
6.经质谱验证分析,此阳性蛋白点为Zeta crystallin/醌氧化还原酶。
通过对以上实验中各组胶图的比较分析,发现Zeta crystallin(Quinone Reductase)普遍存在于大鼠的“太溪”穴及肾脏皮质组织,且当机体接受到针刺信号后,Zeta crystalline/醌氧化还原酶的蛋白表达量有所增加,综上所述,作为一种非解剖学和组织胚胎学所能见的生物大分子——Zeta crystallin(Quinone Reductase)可能是大鼠肾经肾脏组织与原穴“太溪”之间所存在的相关物质基础。